GeneRulor NGS® DNA纯化磁珠

GeneRulor NGS® DNA纯化磁珠基于SPRI（Solid Phase Reverse Immobilization）原理，适用于高通量测序文库构建中DNA纯化与片段大小分选。本产品兼容各品牌DNA建库试剂盒和文献报道的建库流程，与目前广泛使用的同类产品使用方式完全相同，文库的产量、大小分布与标准产品高度一致，可无缝替代同类产品，有效降低建库成本。

产品规格

保存条件

2～8℃保存，根据不同目的地调整运输方式。产品保质期为18个月。

使用范围

适用于DNA文库构建，特别适合于高通量测序平台样品制备。

注意事项

1. 提前约30 min将SolidPure DNA纯化磁珠从2～8℃取出，使其温度平衡至室温，这样可以保证DNA的回收率。使用前，请旋涡振荡以保证混匀。
2. 80%乙醇洗涤时，需要保持样品管静置于磁力架上，并且不要搅动磁珠。晾干时，要避免磁珠过分干燥。如果磁珠出现龟裂，则提示磁珠过分干燥，此时DNA的洗脱效率会降低。
3. 在用Agilent 2100 Bioanalyzer生物分析仪分析文库时，有时峰型会在较大分子量处出现拖尾。这通常是由于纯化后的PCR产物里有微量的磁珠残留。建议在最后一步吸取上清时，用磁力强的磁力架，并且尽量小心，避免搅动磁珠。

DNA纯化

1. 将磁珠液提前30 min从2～8℃取出，静置使其温度平衡至室温。
2. 颠倒或旋涡振荡使磁珠液充分混匀，根据表1吸取适量磁珠液加入DNA样品中，使用移液器轻轻吸打10次充分混匀。
3. 室温孵育10 min，使DNA结合到磁珠上。
4. 将样品置于磁力架上，待溶液澄清后(约5 min)，小心移除上清。
5. 保持样品始终处于磁力架上，加入200 μl新鲜配制的80%乙醇漂洗磁珠，室温孵育30 sec，小心移除上清。
6. 重复步骤5一次，总计漂洗两次。
7. 保持样品始终处于磁力架上，室温下开盖干燥磁珠约5-10 min。
8. 将样品从磁力架上取出，加入适量无核酸酶水，涡旋振荡或使用移液器吹打充分混匀，室温静置2 min。在磁力架上静置5 min待溶液澄清后，小心吸取上清至一个新的无核酸酶离心管中。

表1. DNA纯化条件参考

图1.不同磁珠用量对应的回收100 bp marker结果图

DNA片段分选

1. 将磁珠液提前30 min从2～8℃取出，静置使其温度平衡至室温。
2. 旋涡振荡使磁珠液充分混匀，按照分选条件说明吸取适量体积磁珠液(第一轮分选，参考表2)加入纯化后的DNA处理样品中，使用移液器轻轻吸打10次充分混匀。
3. 室温孵育10 min，使DNA结合到磁珠上。
4. 将样品置于磁力架上，待溶液澄清后(约5 min)，小心吸取上清至一个新的无核酸酶离心管中。 注意：转移上清时，建议残留2 μL液体于管底，避免吸到磁珠并影响分选效果。
5. 加入适量磁珠液(第二轮分选，参考表2)，使用移液器吸打10次充分混匀。
6. 室温孵育10 min，使DNA结合到磁珠上。
7. 将样品置于磁力架上，待溶液澄清后(约5 min)，小心移除上清。
8. 保持样品始终处于磁力架上，加入200 μl新鲜配制的80%乙醇漂洗磁珠，室温孵育30 sec，小心移除上清。
9. 重复步骤8一次，总计漂洗两次。
10. 保持样品始终处于磁力架上，室温下开盖干燥磁珠约5-10 min。
11. 将样品从磁力架上取出，加入适量无核酸酶水，涡旋振荡或使用移液器吹打充分混匀，室温静置2 min。在磁力架上静置5 min，待溶液澄清后，小心吸取上清至一个新的无核酸酶离心管中。

表2. DNA片段分选参考条件

图2. Agilent 2100 high sensitivity DNA chip electopherogram Smear fragments 溶于ddH2O，使用0.80×/0.20×至0.45×/0.15×磁珠进行片段分选