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文献和实验那么如何通过改变抗体稀释液的配方,寻求抗体孵育的最佳条件呢?首先要认清,抗体稀释液没有一个绝对通用的配方;一种抗体一个脾气。其次,抗体稀释液的配方要兼顾与特异性抗体竞争抗原的强度,以及对其他区域的封闭强度两方面的平衡。目前,抗体稀释液中可以充当封闭蛋白的主要有milk,BSA和gelatin,似乎很少的样子 。。。可是,你有没有考虑过“复方”?--这下配方无限多了吧。1. 采用milk,BSA和gelatin的单方。3% milk,5% BSA,2.很多情况下单方的浓度很高了,背景问题仍不能
膜上。而且不会转过头。另外赶气泡的时候一定注意看胶和PVDF膜之间是不是接触好了。 6.关于封闭:我自己试过37度脱脂牛奶摇床上摇一个小时和4度脱脂牛奶过夜两种,觉得后者比较好。 7.关于抗体:因为订的是国产抗体,所以一抗都是用完之后不再重复利用,但是二抗保存在—20度还能再用一次。试过一抗4度过夜和37度摇床两小时,可能是我的抗体在37度的温度中发挥效应比较好,目的蛋白都是在37度摇床两小时这种操作方法中出的,和传统的4度过夜不太一样。我也不知道具体原因。 8.关于ECL显色:一般我是曝光3分钟
,随后将生理盐水分别与清洗液、稀释液进行搭配使用,发现用生理盐水替代清洗液时PLT本底恢复正常,即确认为清洗液质量问题引起的PLT本底升高。而后换用国产试剂,进行同样检测,PLT本底也为正常,此时更加让笔者确信PLT本底的升高是进口清洗液的质量问题而引起的异常升高。 随后进行例行仪器保养,在进行RBC Transducer用酶清洗液泡洗时,发现Transducer腔内电极上有少许血凝块溶解现象,由此联想到PLT本底值的升高是否与此该凝块有关。 因此,在仪器保养结束后,又换回










