小鼠单抗 GST 标签

4 种常用的蛋白纯化标签说明

蛋白纯化的方法很多，如层析法、电泳法、超离心法、超滤等，其中蛋白质亲和层析法通常只需要一步操作便能将目标蛋白从混合物中分离出来，且纯度很高，因而备受实验者的青睐。 在进行蛋白表达时，选择合适的标签有利于蛋白的纯化，促进蛋白的可溶性，因此了解几种常用的蛋白纯化标签很重要。一般来说，常用的蛋白纯化标签主要有 His tag、GST tag、MBP tag、NusA tag、Strep tag 等，那么这些蛋白纯化标签有什么不同之处呢? His tag(组氨酸标签) 融合蛋白是目前最常用的表达

常用蛋白标签、序列及特性

）时。这有助于研究低丰度蛋白质和优化难以表达的蛋白质项目。它也是一个很好的纯化标签。FLAG 序列还含有肠激酶切割位点，如果标签位于 N 端，切除后不留多余的残基。谷胱甘肽 S - 转移酶（GST）GST 是最早被使用的表位标签之一；它可以置于 N 或 C 端并可以蛋白质的可溶表达。用谷胱甘肽结合树脂进行纯化。绿色荧光蛋白（GFP）在表位标签中独一无二，GFP 是一种自发荧光的 27 kDa 标签，可通过荧光显微镜直接在活细胞中检测到。血凝素 A（HA）HA 来自流感血凝素蛋白的结合结构域，含有高

大家都在做的GST pull-down实验

，只要互作蛋白间具有相互结合的结构域基础即可实验证明；Co-IP 实验是细胞内高表达目的蛋白，并通过 IgG 球珠-抗体-蛋白复合物体系，分离出互作的蛋白复合物，是细胞内的体内反应结合。2. GST pull-down 实验优点① 可验证蛋白质-蛋白质之间的直接互作。② GSH 谷胱甘肽偶联球珠亲和力强，洗脱纯度高。3. GST pull-down 实验缺点① 验证互作是在试管中进行的生化反应，不能够完全反应细胞内蛋白真实互作状态。② 融合表达的 GST 标签，肽链较长，可能会改变原目的蛋白的原有的折叠结构。