WB转印蛋白Marker 10 kDa-200 kDa

WB实战指南（三） 之 转印

转印——转印效率对WB结果的影响并不如书本和网络上宣扬的那么大！首先必须澄清的是，很多时候新手会把WB结果无信号归咎于转膜不够充分，实际上转膜效率对最终结果的影响所占比重并不高，真正取决定性因素的是抗体识别能力的强弱，以及如何正确使用抗体，这个问题下节讨论。有一个简单的例证，Biorad提供的3mm厚滤纸初次使用时，通常转膜效果不理想（从预染的marker深浅可知），但对多数一般丰度的蛋白的检测没有任何影响（建议少用这种新滤纸做那种含量特别稀少或者转膜非常困难的蛋白）。没有很好的策略可以解决

10kDa 干扰素γ诱导蛋白（IP10）在牛生物样本中的精确检测实验

为了便于计算，尽管浓度为自变量而 O.D. 值为因变量，我们绘图时仍采用标准品的 O.D. 值作为横坐标 （X 轴），标准品的浓度为纵坐标 （Y 轴）。同时为了试验结果的直观性，图中提供的是原始数据而非对数值。推荐使用对数 值建立标准曲线图。由于实验操作条件的不同（如操作者、移液技术、洗板技术和温度条件等），标准曲线的 O.D. 值会有所差异。所提供的标准曲线仅供参考，实验者需要根据自已的实验建立标准曲线。牛 10kDa 干扰素γ诱导蛋白 （IP10） 检测试剂盒标准曲线检测

Labeling Gizzard Myosin with Tetramethylrhodamine Iodoacetamide (Primarily 17kDa Light Chain)

Day 1 Materials 1.50 mM KCl,0.2 mM EGTA,2 mM ATP,2 mM MgCl2,10 mM HEPES,pH 7.0.Need 500 ml. Procedure 1.Thaw appropriate volume of frozen gizzard myosin to obtain 10-20 mg. 2.Centrifuge in a SS34 rotor at 9,000 rpm,4℃ for 20 min. 3.Resuspend