(morpholin-4-ylmethyl)phenyl-3

多肽的固相合成、切割及纯化

问题：1、选择合适的切割及脱保护试剂，根据合成肽氨基酸的不同而选择；2、选择合适的试剂浓度、反应时间、温度等条件；3、氨基酸侧链的保护，在切割时，切割试剂或切割产物可能对一些对其敏感氨基酸侧链造成破坏或修饰，因此，反应时要选择合适试剂和条件，必要时，对敏感侧链进行保护，使其遭到最小程度的破坏。   （一）切割试剂及条件 试剂配方：TFA/phenyl/water/TIPS=88/5/5/2 条件： 用量   0.5g介质/5ml TFA液 温度   冰浴

原创:下游纯化简易讲义

含量测定 紫外吸收法、Lowry法、Bradford染料结合法（考马斯亮兰G-250）等。 c、样品复杂度检测 HPLC（离子交换、凝胶过滤、反相）、SDS-PAGE、等电聚焦、毛细管电泳（CE）。 4、蛋白质的来源 （1）天然蛋白： 天然产物中的目的蛋白一般含量很少而且组分极复杂，在分离过程中须采用多个步骤才能去除各种杂质，并应在整个过程中降低蛋白水解酶的活性。 （2）重组蛋白： 重组蛋白则目标蛋白的丰度较高。重组蛋白主要有三种表达定位： a、细胞质：在这种情况下，必须破坏细胞结构才能得到目的

【资源】蛋白纯化经验指南（）

我觉得是这样的，既然你是提取那肯定是有沉淀和上清，你的目标蛋白的分子量你是应该知道的，那么跑电泳先看它到底是在上清还是沉淀里，剩下的问题你再解决如何提取。 对于不同的酶要看酶稳定如何，你可以用不同的PH去提取，我曾经提取一个酶用水就是提取不出来，需要用盐才能提取出来，多试试，设计个方案，这样才能解决问题，所以不一定加甘油就管用，你还得注意破碎本身会不会有问题，倒回去做做也许能找到真正的原因。有什么问题继续探讨。 6) HPLC是用来分析检测or分离纯化？ 如果可以用来纯化，上样