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HPLC培训教程

附件：高效液相色谱法（HPLC）复核细则 一、对起草单位的要求： 1．HPLC法用于药品的有关物质检查或含量测定时，需提供建立HPLC法的依据及参考文献。 2．应对建立的方法进行论证，按照中国药典2000年版二部凡例与附录收载的药品质量标准分析方法验证项下所列的要求进行试验。 3．建立方法时，应考虑下列事项： ①首选填料为十八烷基键合硅胶，并至少对两根不同品牌的色谱柱进行比较试验，其中一根为国产柱。 ②流动相首选甲醇-水系统，应

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和极性较弱的化合物可选择非极性键合相。利用特殊的反相色谱技术，例如反相离子抑制技术和反相离子对色谱法等，非极性键合相也可用于分离离子型或可离子化的化合物。ODS(octadecyl silane)是应用最为广泛的非极性键合相，它对各种类型的化合物都有很强的适应能力。短链烷基键合相能用于极性化合物的分离，而苯基键合相适用于分离芳香化合物。 另外，美国药典对色谱法规定较严，它规定了柱的长度，填料的种类和粒度，填料分类也较详细，这样使色谱图易于重现；而中国药典仅规定填料种类，未规定柱的长度和粒度

常用的色谱分析方法

的高峰。作成适当的衍生物往往会有利于碎片信号峰的产生。当采用四级质谱作为分析器时，由于它能进行快速的电场改变，因而可在谱的全程中任意选择几个碎片质量作成质量碎片图谱；而磁铁质谱仪仅能在峰的两侧的20%左右的质谱范围内选择其它信号峰。通过测量质量碎片图下的面积，即可进行定量分析。若以供试物的稳定同位素标记物作为内标，可用于人体上直接进行研究和测定，是十分理想的定量方法。此法大多已计算机化，整个过程十分快速而方便。  3、液相色谱-质谱联用(LC-MS)：主要是HPLC-MS联用，由于接口技术的突破