(-)-Piperazine-2-carboxylicaci

【资源】蛋白纯化经验指南（）

时你们一般用多少柱床体积？10X够了吗？ 一般也就3-5个床体积吧，离子交换需要平衡体积大点也，10X足够了 101) 有个关于胰岛素精纯化的问题想向你请教，我已取得95%纯度样品。但杂质大于1%，进一步纯化，用什么柱子，具体操作又怎样做呢，谢谢赐教。 我知道，我好象回复过，你用反相硅胶10um的柱子1.0X25cm或者2.2X25cm的柱子做制备，这样可以达到99%以上的纯度，别的方法很难做到你需要的纯度，此外胰岛素也可以用等电点沉淀的办法去掉一些杂质。 HPLC制备你可以参考

蛋白纯化经验指南

沉淀，我用0.5%CHAPS助溶可勉强溶解部分，目的蛋白疏水性比较强。既然是疏水性很强你可以加点甘油或者乙二醇降低极性，这样溶解就会好得多，此外你也直接加2%的PEG这样也降低极性，同时保护你的蛋白，你再做纯化就可以了，我以前遇到这样的蛋白是用10%的乙醇加3-5%的PEG5000，这样的情况下蛋白还是活性回收率很高，我觉得那些表面活性剂能不用还是不用的好，你失去活性你可以监测一下提取，纯化，酶切到底哪里失去了活性，这样更容易解决你的问题。还有注意缓冲液PH值，看看改变它对溶解度有没有影响。蛋白

大肠杆菌中非天然氨基酸的整体掺入

工具 [2] 。用非天然氨基酸整体地扰动生物体的蛋白质组，已被用来在实验中探测基因编码的进化。细菌和噬菌体已适应于非天然氨基酸的掺入，并且为这些进化转变所需要的突变的数量和类型也已经过检验 [ 3~6 ]。 虽然有大量文献涉及细菌在非天然氨基酸环境中的生长（如用色氨酸类似物，见参考文献 [ 7~11 ] )，但其中大部分只是叙述技术，而没有考虑工艺规程的改变怎样影响实验结果。为此，我们在这里提供一些更详尽的方法。2. 材料 ( 1 ) 大肠杆菌菌株 C600  和衍生菌株 C600p。用于转化的菌株