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      /2)――峰高一半处的峰宽。Wh/2=2.355σ Ø标准偏差(standard deviation,σ)――正态分布曲线x=±1时(拐点)的峰宽之半。正常峰的拐点在峰高的0.607倍处。标准偏差的大小说明组分在流出色谱柱过程中的分散程度。σ小,分散程度小、极点浓度高、峰形瘦、柱效高;反之,σ大,峰形胖、柱效低。 Ø峰面积(peak area,A)――峰与峰底所包围的面积。A=×σ×h=2.507 σ h=1.064 Wh/2 h 2.定性参数(保留值) Ø死时间

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      的面积。A=×σ×h=2.507σh=1.064 Wh/2h 2.定性参数(保留值) 死时间(dead time,t0)——不保留组分的保留时间。即流动相(溶剂)通过色谱柱的时间。在反相HPLC中可用苯磺酸钠来测定死时间。 死体积(dead volume,V0)——由进样器进样口到检测器流动池未被固定相所占据的空间。它包括4部分:进样器至色谱柱管路体积、柱内固定相颗粒间隙(被流动相占据,Vm)、柱出口管路体积、检测器流动池体积。其中只有Vm参与色谱平衡过程,其它3部分只起峰扩展作用。为防止峰

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      损。 04 避坑要点 ▪沉淀必先去除:蛋白聚集体会不可逆堵膜,流速归零即报废;   ▪起始浓度≥ 1 mg/mL:过低会因膜吸附导致回收率骤降;浓缩倍数建议≤ 20×; ▪膜不可晾干:干燥后孔径改变、基本报废,暂不用须保湿 4 ℃ 存放; ▪非无菌产品:严禁高温高压灭菌、次氯-酸-钠消毒;表面消毒仅限 70% 乙醇短时处理; ▪高盐(> 500 mM)先稀释:缓冲液 pH 差 ≤ 1,防止蛋白沉淀; ▪一次性使用:科研发表、GMP/GLP 场景禁止复用,珍贵样本

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