鼠尾I型胶原蛋白，AB65486-5ml

大鼠脑微血管内皮细胞的分离与原代培养

钠，NaHCO3购自中国医药集团上海化学试剂公司；青、链霉素购自上海生工生物工程有限公司；胎牛血清（FBS）购自PAA Laboratories；碱性成纤维细胞生长因子（bFGF），胶原酶/分散酶（collagenase/dispase）购自Roche公司。 1.3 重要仪器 低温离心机（1 Centrifuge 5810 R，购自Eppendorf；2 himac CR 22F，购自Hitachi） 1.4 试剂配制 1mg/ml鼠尾胶（用0.2%乙酸配制），1%明胶（用D-Hanks液配制

小鼠、大鼠采血法

mm3。如果长期反复取血，应先靠近鼠尾末端穿刺，以后再逐渐向近心端穿刺。 （3）眼眶静脉丛采血 采血者的左手拇食两指从背部较紧地握住小鼠或大鼠的颈部（大鼠采血需带上纱手套），应防止动物窒息。当取血时左手拇指及食指轻轻压迫动物的颈部两侧，使眶后静脉丛充血。右手持续接7号针头的1mL注射器或长颈（3-4cm）硬质玻璃滴管（毛细管内径0.5-1.0mm），使采血器与鼠面成45℃的夹角，由眼内角刺入，针头斜面先向眼球，刺入后再转180度使斜面对着眼眶后界。刺入浓度，小鼠约2-3mm，大鼠约4-5

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）。 （5）推注完成后停留5-10 s，可轻按摩小鼠胸部，促进生理盐水与肺泡充分接触，随后轻柔回抽灌洗液。 （注：肺泡灌洗液自然回收率较低，通常为50%-70%，可重复灌洗3-4次；全程需将收集的灌洗液置于冰上保存，避免样本变质影响后续检测。） 3. 流式检测 1）将收集好的肺泡灌洗液300 × g离心3-5 min，离心完后去掉上清，留下白色沉淀。 （2）加入Cell Staining Buffer重悬，调整细胞密度至1×107/mL。 （3）取100 μL细胞悬液，加入CD16/32封闭抗体，轻轻