通用引物1492R，AB64483-1ml

【求助】土壤微生物总DNA的提取及细菌16S rDNA的PCR扩增出问题了，寻求大家的帮助！

tyuanc 我用MO Bio的soil DNA Isolation Kit提取土壤总DNA，提取的DNA直接跑胶，看不见任何条带，采用细菌16S rDNA通用引物（27F和1492R)进行PCR扩增，也没有结果，有一次我将试剂盒提取的DNA50倍稀释后，进行细菌16S rDNA的PCR扩增，扩增出了目的条带，我所用的酶为Takara的LA Taq，用普通的Taq酶扩增不出来，但隔了一周后再去重复，什么条件都一样，却再也扩不出来了，我重新提取了新的DNA进行

胶体金标记物的制备

沉淀：长期低温保存的蛋白质或4℃较长时间保存的抗体，特别是在浓度高于2mg/ml的情况下，很容易形成聚合物，聚合物对标记过程及免疫金探针的稳定性有一定影响，因此，标记之前须离心以除去这些聚合物。一般以100000r/min 4℃离心60min取上清液，调整蛋白质浓度至1mg./ml即可用于标记。二、胶体金pH值的调整胶体金与蛋白质的结合成功与否，取决于pH值，一般只有在蛋白质等电点（PI）略偏碱的条件下二者才能牢固地结合，因此，标记之前须将胶体金溶液的pH值调至待标记蛋白质的等电点略偏碱。需要提高

Immunofluorescence in yeast-酵母免疫荧光

Spin  2  ODU  of  cells  3000rpm,  5' Resuspend  in  5ml  of  0.1M  KPi  pH  7.0 Add  0.6ml  37%  formaldehyde  and  rotate  (on  nutator)  at  r.t.  for  2  hrs. (can  store  cells  fixed  at  4'C  O/N) Spin  down  cells  (2500  rpm