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文献和实验细胞是用95%的酒精固定20分钟,PBS洗两遍,hochest33258(100ug/ml)染10分钟,然后PI(100ug/ml)染20分钟,50%甘油封片。至于荧光显微镜的激发波长,我还不是很清楚, midas: 哈哈,反了!应该先染色,后固定!hochest33258对活细胞的损伤稍大一些,最好用hochest33342。终浓度用10ug/ml就可以了!激发波长:hochest用紫外激发;PI用绿光激发! linger:您曾经发过一张帖子写到“hoechsts33258,hoechst33342
颗粒位于细胞表面和细胞之间。 ②荧光染色法:荧光染色用能与DNA特异性结合的荧光染料Hoechst 33258,可使支原体内含有的DNA着色,染色后用荧光显微镜观察。具体方法如下:首先将细胞接种盖玻片上,在细胞未长满前取出玻片,用不合酚红的Hanks液漂洗一下,用l: 3醋酸甲酵固定10Min,然后用生理盐水漂洗。置于用生理盐水配浓度为50pg/ml的Hoechst 33258中染色10min。染色后用蒸溜水洗1—2min。向细胞面滴加pH5.5磷酸缓冲液数滴,然后置荧光显微镜下观察。镜下支原
(Hoechst 33258), DAPI。三种种染料与DNA的结合是非嵌入式的,主要结合在DNA的A-T碱基区。紫外光激发时发射明亮的蓝色荧光。Hoechst是与DNA特异结合的活性染料,储存液用蒸馏水配成1mg/ml的浓度,使用时用PBS稀释,终浓度为10 ug/ml。DAPI为半通透性,用于常规固定细胞的染色。储存液用蒸馏水配成1mg/ml的浓度,使用终浓度一般为10 ug/ml。结果评判:细胞凋亡过程中细胞核染色质的形态学改变分为三期:Ⅰ期的细胞核呈波纹状(rippled)或呈折缝样(creased
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