过氧化氢酶（牛肝脏），AB65448-10ml

模拟过氧化物酶的制备、固定与应用

一．实验目的 学习一种人工合成模拟过氧化物酶的方法，了解柱子型固定酶的原理以及感性认识酶分析法的一些应用。 二．实验原理 过氧化物酶的辅基是血红素。在体外将血红素与牛血清白蛋白结合制备成含血红素的蛋白质分子作为模拟过氧化物酶。在确定血红素与牛血清白蛋白结合后，检测其的过氧化物酶活性。然后将此人工模拟酶固定在载体琼脂糖凝胶（Sepharose 4B）上并装柱，应用于检测样品中痕量过氧化氢的含量，因为过氧化氢的测定

过氧化氢酶catalase

酶和过氧物酶（ pero-xidase）给以氢过氧物酶（ hydroperoxidase）的共同名称。无论动物、植物、微生物，凡是好氧的细胞均存在此酶。在动物的肝脏、肾脏、红细胞里特别多。牛肝脏的过氧化氢酶分子量约 23万，每分子酶含 4个正铁血红素的作用基团。过氧化氢酶的最大吸收光谱在 629， 540， 500， 405毫微米。加入 H2 O2 或 CH3 COOH，可见到过氧化氢酶的吸收光谱的变化，认为这是因为这些物质结合于正铁血红素而形成酶——底物复合物的缘故。  

免疫组化技术实用案例课程：第一期

德公司买了一小瓶10ml。从第二批实验开始，组化实验结果一直显示强背景着色，特异性染色很难辨别。 问题及其解答： 产生组织切片非特异性染色的原因有哪些？如何解决？ 1. 抗体孵育时间过长、抗体浓度高易增加背景着色。这可通过缩短一抗/二抗孵育时间、稀释抗体来控制。这是最重要的一条。 2. 一抗用多克隆抗体易出现非特异性着色，建议试用单克隆抗体看看。 3.内源性过氧化物酶和生物素在肝脏、肾脏等组织含量很高（含血细胞多的组织），需要通过延长灭活时间和增加灭活剂浓度