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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
-20°C
- 英文名:
Lambda Exonuclease
- 库存:
99
- 供应商:
联硕生物
- 规格:
1KU
纯度:5 U/μl
保存温度:-20°C
英文名称:Lambda Exonuclease
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文献和实验相关专题 重组DNA技术工具酶 一、 限制性核酸内切酶及其应用 (一)限制性核酸内切酶的发现 当λ(k)噬菌体侵染E.coli B时,由于其DNA中有EcoB核酸酶特异识别的碱基序列,被降解掉。而E.coliB的DNA中虽然也存在这种特异序列,但可在EcoB甲基化酶的作用下,催化S-腺苷甲硫氨酸(SAM)将甲基转移给限制酶识别序列的特定碱基,使之甲基化。 Eco核酸酶不能识别已甲基化的序列
性为3u/ml,单位定为Weiss单位(0.01Weiss单位活性的T4DNA接酶在16℃时20ml体系反应20分钟,可以连接95%的1gλDNA-HindIII的酶切物)。无DNA外切酶或内切酶活性。可进行50次以上常规DNA接反应。低温运输,-20℃保存。有效期6个月。 10×LigationBuffer成分: Tris-HClpH7.8600mM MgCl215mM DTT100mM ATP10mM 连接
。通过凝胶比较连接的和未连接的DNA 片段并检查分子量标准DNA 片段是否被连接成高分子量的片段,用大约20ng DNA 分子量标准(如Lambda DNA/Hind III 分子量标准)建立一个连接反应以检测连接酶及缓冲液的活力。问题:T 突出端丢失,引起载体平端连接,因而蓝色菌落数高于白色菌落数。建议:避免核酸外切酶的引入,降解T 突出端。只使用无外源核酸酶的T4 连接酶 。问题:插入克隆片段与插入对照DNA相比,白色菌落的比例低。建议:如果使用的感受态细胞的转化效率很高( ≥1 × 109 cfu
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