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联硕生物
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文献和实验科镊子提起腹膜,用 5mL 注射器往小鼠腹腔注射 2.5mL 预冷 PBS(勿扎到脏器),轻揉小鼠腹部1~2 min。注射器回抽腹腔灌洗液,收集于15mL 离心管中。 重复第 5 步 5 次,冲洗腹腔,可观察到冲洗液逐渐澄清。 将收集的腹腔灌洗液 300 g 离心 5 min,弃上清。 用细胞染色缓冲液或者含 10% 胎牛血清的 1640 培养液重悬细胞。 进行细胞计数,并调整细胞浓度至 1×107/mL。 注意事项: 若第 7 步离心弃上清后发现细胞沉淀中有较多红细胞,且检测目的细胞非红细胞,先
~5%人AB血清的RPMI-1640 培养液中,计数细胞,用1%台盼蓝染色检测细胞活力(应〉90%),再用同样培养液将细胞配成1×106~2×106/ml。 2)分离大颗粒淋巴细胞 1.配制不连续Percoll梯度:取Percoll原液与10倍浓缩的PBS 以9:1的比例混合,此时溶液为100% Percoll,比重是1.127,毫克分子渗透压浓度为290mOsmol/kg。将100% Percoll与含0.75%牛血清蛋白的RPMI-1640培养液混合配成41.1%
人AB血清的RPMI-1640培养液中,计数细胞,用1%台盼蓝染色检测细胞活力(应〉90%),再用同样培养液将细胞配成1×106~2×106/ml。 2)分离大颗粒淋巴细胞 1.配制不连续Percoll梯度:取Percoll原液与10倍浓缩的PBS以9:1的比例混合,此时溶液为100% Percoll,比重是1.127,毫克分子渗透压浓度为290mOsmol/kg。将100% Percoll与含0.75%牛血清蛋白的RPMI-1640培养液混合配成41
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