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文献和实验体提取实验。 6、细胞培养过程中的死细胞是否会影响外泌体的提取? 会的。在收获细胞时,应确定死亡细胞占比不超过 5%。细胞凋亡/死亡过程中会释放大量囊泡,它们在外泌体的提取纯化过程中会污染活细胞产生的外泌体,同时易堵塞 EPF 纯化柱。 7、准备做细胞外泌体 Small RNA 的 NGS 测序,初始样品量需要准备多少? 普通肿瘤细胞系推荐使用 50mL 以上的初始样品量。由于某些细胞(如悬浮细胞、干细胞、免疫细胞、神经细胞等)中外泌体含量比较低,建议先通过 10 kD~ 100 kD 的超滤
小鼠腹水及单细胞悬液制备流程 配制 6% 淀粉肉汤。 6% 淀粉肉汤配制方法:牛肉膏 0.3g、蛋白胨 1.0g、氯化钠 0.5g、蒸馏水 100mL,上述材料混合加热后加入可溶性淀粉 6.0g;溶解后,121℃ 高压灭菌 15~20 min,EP 管分装封口,将肉汤放置于 4℃ 保存。 小鼠腹腔注射 1mL 6% 淀粉肉汤(注意避开肠管和内脏),刺激 60~72h。 颈椎脱臼法处死小鼠,用 75% 酒精浸泡小鼠 5min。 将小鼠置于解剖板中,固定四肢,剪开皮肤,充分暴露腹膜。 用眼
【原创】暗室实验(化学发光底物检测方法)及Western Blot实验优化方法
暗室实验 暗室实验的操作流程: 1. 新鲜配制1-2ml工作液(A液与B液1:1或1:40混合配制) 2. 进入暗室,在黑暗的条件下,加入1μl未稀释的二抗(HRP连接物) 3. 混合后,可立即在暗室中观察到蓝色光 暗室实验的注意事项: ? 工作液按正确比例混合,且新鲜配制 ? 在暗室中加入二抗 ? 直接使用未稀释的二抗 ? 加入二抗后,立即观察 注:暗室实验可同时检测底物是否有活性,以及二抗是否有活性。 如果暗室实验结果阴性: 更换其它二抗,再次进行
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