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99
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鹿森生物
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1ml
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文献和实验Whole mount in situ hybridization with digoxygenin probes
ml capped tube and rinse with EBR. 3. Fixation Add to the 15 ml tube : Fixing solution (Fixing sol.= 0.1 M Hepes, pH 6.9, 2 mM MgSO4, 1mM EGTA) 1.6 ml 20% Paraformaldehyde 0.4 ml Heptane 8 ml Shake vigorously for 20' Remove
) 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 ①当分别加入0.1ml 10%氯化钠后、混匀静置2h以上观察结果。 ②没有加入蛋白质的管为对照管。 ③小于5nm颗粒的胶体金溶液,每个管内应加入5μl33%的双氧水,否则有不变蓝色及聚沉现象。未加蛋白及加入蛋白量不足以稳定胶体金的试管,即呈现由红变蓝的聚沉现象,而加入蛋白量达到或超过最低稳定量的试管则胶体金的红颜色不变。其中含蛋白量最低的试管即含稳定1ml胶体金的必须蛋白量。在此基础上再加上20%即为稳定所需蛋白质的实际用量。 四、蛋白质的胶体金标记 当蛋白质的最适稳定量及标记的最佳pH
基磺酰氟0.1mM。蔗糖20%(g/v),氯化钠200mM,过滤灭菌,100ml培养物/5ml细菌周质腔蛋白提取液),振荡混匀,置于4℃轻摇1小时,12000rpm,4℃离心20分钟,取上清。将提取物用PBS透析过夜,在FPLC上,用0.01M PBS pH7.4平衡Protein G Agarose 亲和层析柱,上样,先用0.01M PBS pH7.4平衡,至基线稳定后,用0.1M pH2.8甘氨酸缓冲液洗脱,收集洗脱液。7、Fab和F(ab)2竞争免疫荧光结合实验将浓度为4ug/ul的HI47溶液与1106
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