SHP-77/LUC 人小细胞肺癌细胞荧光素酶标记

SHP-77/LUC人小细胞肺癌细胞荧光素酶标记

产品编号：CL-760h

一、细胞介绍

SHP-77 保留了SCLC的重要特征，具有稳定的生物化学特性，可以连续培养。该细胞系是小细胞肺癌中一种不常见的未分化大细胞突变体。它虽然具有突变体的形态，但保持了经典SCLC的生化特性。电子显微镜观察发现存在腺体形成和胞浆内板层体(intracytoplasmic lamellar bodies)。这些细胞表达神经内分泌标记物L-多巴脱羧酶和致密核心分泌颗粒(dense core secretory granules)。

SHP-77可用做检测51Cr和111In释放对体外细胞及裸鼠体内毒性的靶标，用于评估肺癌患者的细胞和血清的免疫反应水平。该细胞可用于评估接受放射或化学疗法治疗的SCLC患者的免疫状况。经本库STR检测无误。该细胞通过慢病毒转染的方式携带Luc基因。

二、细胞特性

来源：54岁男性肺，小细胞肺癌

形态：上皮细胞样，悬浮生长

含量：>1x10⁶cells

规格：T25瓶x1（常温运输）/含有1mL细胞悬液的冻存管x2（干冰运输）

用途：本产品仅供实验室研究使用，不可用于动物或人类治疗或诊断用途

注意：每传 10 代左右，用嘌呤霉素（4ug/ml）巩固一下

三、完全培养基及冻存液配制

1) 该细胞完全培养基为：RPMI-1640＋10%FBS＋1%P/S＋1%GlutaMAX-1＋1%Sodium Pyruvate

2) 培养环境：37℃；95%Air，5%CO₂；培养箱湿度为70%-80%

3) 冻存液：推荐使用非程序无血清细胞冻存液（货号：RC-0102）

四、收货注意事项

1) 收到细胞后，请检查发货培养瓶的状况，若发现培养瓶破损、有液体溢出及细胞有污染，冻存细胞若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落，请拍照后及时与我们联系。

2) 在显微镜下确认细胞生长状态时，最好在低倍镜（4或5X物镜)下进行，能准确判断细胞的传代密度。看细胞的形态请在10×和20×物镜下，同时给刚收到的细胞拍照，（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为细胞需要售后时提供收到细胞时细胞状态的依据。

3) 对于悬浮生长的细胞：若细胞密度超过80%，则可以根据以下提供的细胞培养步骤进行传代或冻存；若细胞密度未达到80%，可收集细胞悬液离心，去除上清，加入 6mL 完全培养基，放入细胞培养

箱中继续培养。

 

细胞培养操作说明

一、细胞复苏

1. 将含有1mL细胞悬液的冻存管快速放入37℃水浴中解冻，轻轻摇晃加速溶解，直至冻存管中无结晶，然后用75%酒精擦拭冻存管外壁。

2. 将冻存管内容物加入到含有5mL完全培养基的离心管中混合均匀，1000rpm离心5min。

3. 弃去上清液，用1-2mL完全培养基生补加5-6mL完全培养基后吹匀，接种于T25培养瓶中，放入培养箱中培养过夜。

4. 第二天换液并检查细胞密度。

注意：在复苏冻存细胞时始终使用防护手套、衣服和佩戴防护面罩，避免冻存管爆炸造成人员伤害。

二、细胞传代：细胞密度达80%-90%，即可进行传代

方法一（离心法）：将细胞悬液收集到离心管中，1000rpm离心5-8min，弃去上清，加入1-2mL完全培养基重悬，按1：2~1：3的比例进行分瓶（T25瓶）传代，补充新的完全培养基至5-8mL/瓶，放入37℃细胞培养箱中培养。

方法二（半量换液法）：将T25瓶竖起来，在培养箱静置10-20分钟，肉眼可见大部分细胞沉在底部，轻轻吸去半数培养基后，将剩余细胞悬起混匀，将细胞悬液按1：2~1：3的比例分到新的含5-8mL完全培养基的T25瓶中，放入37℃细胞培养箱中培养。半量换液3次可以离心传代一次。

三、细胞冻存

收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。步骤如下：

1. 细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中，可使用血球计数板计数，来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×10⁶~1×10⁷个活细胞/mL。

2. 1000rpm离心3-5min，去掉上清，用细胞冻存液重悬细胞，按每1mL冻存液含1×10⁶~1×10⁷个活细胞/mL分配到一个冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。

3. 将要冻存的细胞放入程序降温盒中，-80℃冰箱中过夜，之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。

注意事项：

所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全柜内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

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