RCF大鼠心肌成纤维细胞

RCF大鼠心肌成纤维细胞

产品编号：CL-045r

细胞特性

含量：>1x10⁶cells；

生长特性：贴壁生长；

细胞形态：成纤维细胞样，短梭形，边缘不规则，单层贴壁生长；

规格：T25瓶或者2mL冻存管包装；

用途：仅供科研使用。

细胞运输、保存及注意事项

	复苏细胞	冻存细胞
包装	充液的T25细胞培养瓶	2mL冻存管
运输条件	常温	干冰
保存方式	75%酒精消毒瓶壁，置于37℃恒温细胞培养箱	-80℃冰箱中保存过夜后转入液氮/立即复苏
注意事项	①　收到细胞后，75%酒精消毒瓶壁，将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们； ②　请在4或5X显微镜下确认细胞状态，同时给刚收到的细胞拍照，10X和20X各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为售后时收到时细胞状态的依据； ③　贴壁细胞：细胞在37℃培养箱中放置2-3h，显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况，有些贴壁细胞在运输过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下，可去除培养瓶中灌液培养基（若有未贴壁的细胞需要离心回收，重悬打入到原培养瓶中），加入新配制的完全培养基6-8mL，放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上，可以对细胞进行传代处理。传代过程中，若因运输振动脱落的细胞需要离心回收； ④　运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1：2传代。

 

培养条件

完全培养基	DMEM-H完全培养基：90%DMEM-H+10%FBS
培养条件	培养温度37℃；气体环境5%CO2+95%空气；
冻存液	50%基础培养基+40%FBS+10%DMSO

 

细胞复苏、传代、冻存操作

（一）细胞复苏

①　冻存管从液氮或-80℃冰箱中取出放入PE手套中，迅速没入37℃水浴锅，摇晃冻存管加速溶解，以1min内全部溶解为宜；

②　在超净台中将溶解好的细胞液加入到装有9mL完全培养基的离心管内，1000-1200rpm离心5min，弃去上清液，用1-2mL完全培养基重悬细胞；

③　将细胞悬液加入到含有5-6mL完全培养基的T25瓶中，放入（37℃，5%CO₂）培养箱培养。

 

注意：建议复苏冻存细胞时始终使用防护手套、衣服和戴上防护面罩，避免冻存管处于温差较大情况下发生爆炸造成人员伤害。

（二）细胞传代

①　将旧培养液吸除，PBS清洗两遍后，加入1-2mL胰酶（0.25%Trypsin+0.02%EDTA）；

②　镜下观察消化情况，在细胞边缘缩小，贴壁松动时（可用吸管吸起些许胰酶轻轻吹打细胞层某处，肉眼可见细胞层脱落，即消化完成，否则继续消化），直接吸掉胰酶，加入5-6mL完全培养基，轻轻吹打细胞层，把细胞层吹落，吹散；

③　将细胞悬液按1:2比例分到新的T25瓶中，添加适当的完全培养基，把细胞悬液打匀，于培养箱中培养；

④　注意培养基pH值变化和细胞密度，定期换液（每周2-3次），待细胞密度达到80%-90%时，重复传代操作或者冻存。

 

注意事项： 细胞具有密度依赖性，首次传代（密度达到 80%），建议 1:2 传代（保持细胞密度），且优先在 T25 瓶中，密封培养瓶的话，处理完后放入培养箱培养记得培养瓶盖子拧松。

 

（三）细胞冻存:

冻存则用3mL冻存液（50%基础培养基+40%FBS+10%DMSO）终止消化，吹打均匀，分为3支冻存管，用程序降温盒于-80℃冻存。

注意事项

所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

   

       网址：www.51cells.cn