SUMO蛋白酶，His tagged

SUMO蛋白酶是一类特异性去除称为小泛素相关修饰物（SUMO）的翻译后蛋白质修饰（PTM）的酶，这种修饰属于泛素及/或类泛素蛋白（UBL）的PTM类别。通常称为“SUMO蛋白酶”的酶是来自酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）的Ubl特异性蛋白酶1（Ulp1）。这是该类酶中第一个被分离出来的。SUMO蛋白酶以“无疤痕”的方式特异性切割SUMO部分。SUMO蛋白酶识别类泛素SUMO结构域的三级结构，并在SUMO结构域C端的x–Gly–Gly–x序列中，在Gly-Gly键后水解肽键。除了切割天然SUMO修饰蛋白外，SUMO蛋白酶还用于切割重组SUMO融合蛋白。SUMO结构域是一种已知的增强溶解性的融合标签，广泛用于重组蛋白表达。可以在SUMO结构域的N端添加组氨酸标签作为纯化标签。该SUMO蛋白酶产品携带6x组氨酸标签，因此可以在消化反应后与切割下来的SUMO结构域一起轻松去除。 SUMO蛋白酶在广泛的温度范围（2–30 °C）、离子强度（0–400 mM NaCl）和pH范围（6–8.5）内活性良好。然而，其活性可能会因底物和条件而有所不同。研究人员需要优化其特定反应条件。初步建议是在30 °C下每毫克目标蛋白使用20单位SUMO蛋白酶反应1小时，或在2–8 °C下过夜反应。随后可以通过SDS-PAGE估计切割效率。如有必要，可以调整SUMO蛋白酶的用量。SUMO蛋白酶在还原剂存在下效果更佳，例如0.5–2 mM DTT。反应混合物中的DTT可以显著提高切割效率，尤其是在较长的孵育时间内。 将重构的产品储存在–20 °C。建议将酶重构在100 μL的水或50%甘油（v/v）中，并补充1 mM DTT。水/DTT溶液应储存在冷冻小分装中，以避免冷冻-解冻循环，这可能对蛋白酶活性产生不利影响。