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文献和实验从单个小鼠肿瘤样本中分选高纯度、高活性 TIL 细胞亚群的完整工作流程
TIL 细胞分选工作流程,解决实验瓶颈:即如何将小鼠肿瘤组织高效的分离成单细胞悬液、磁珠预富集 CD45+ TIL 细胞,然后从同一样品中依次分选高纯度和高活性的 TIL 细胞亚群。 分离高纯度、高活性的 TIL 细胞亚群的工作流程 1. 肿瘤分离 利用带有加热装置的八通道全自动组织解离器 gentleMACSTM Octo 和小鼠肿瘤分离试剂盒分离 1g 小鼠肿瘤组织。 2. CD45+ TIL 的免疫磁性预富集 为了提高目标 TIL 细胞的频率及纯度,从肿瘤分离出来的单细胞悬浮液中, TIL
下 12000rpm 离心 15 min。收集蛋白上清,取少许裂解液用于后续检测各蛋白表达情况。剩余的裂解液加入 Anti-Cdc37,4℃ 缓慢摇晃孵育过夜。用适量裂解缓冲液预处理 ProteinA+G,20uL/管加入各抗体孵育过夜的细胞裂解液中,4℃ 缓慢摇晃孵育 2~4 h。免疫沉淀反应后,4℃,3000rpm,3 min,小心吸取上清,琼脂糖珠用 1 mL 裂解液冲洗 3-4 次,最后加入 15uL 2*SDS 上样缓冲液,100℃,5 min。Laemmli-SDS-PAGE电泳:电泳时根据情况
Detection of ERK1/2 Activities Using Affinity Reagents
) using specific anti-ERK1/2 or anti-p38α antibodies and protein A-Sepharose and subjected to immune complex in vitro kinase assays in the presence of equimolar amounts of GST-PTP-SL 147–288 (2 βg; lanes 1 and 3) or MBP (0.85 μg; lanes 2 and 4). ( B ) COS
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