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- 2025年08月12日
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文献和实验从单个小鼠肿瘤样本中分选高纯度、高活性 TIL 细胞亚群的完整工作流程
TIL 细胞分选工作流程，解决实验瓶颈：即如何将小鼠肿瘤组织高效的分离成单细胞悬液、磁珠预富集 CD45+ TIL 细胞，然后从同一样品中依次分选高纯度和高活性的 TIL 细胞亚群。 分离高纯度、高活性的 TIL 细胞亚群的工作流程 1. 肿瘤分离 利用带有加热装置的八通道全自动组织解离器 gentleMACSTM Octo 和小鼠肿瘤分离试剂盒分离 1g 小鼠肿瘤组织。 2. CD45+ TIL 的免疫磁性预富集 为了提高目标 TIL 细胞的频率及纯度，从肿瘤分离出来的单细胞悬浮液中， TIL
下 12000rpm 离心 15 min。收集蛋白上清，取少许裂解液用于后续检测各蛋白表达情况。剩余的裂解液加入 Anti-Cdc37，4℃ 缓慢摇晃孵育过夜。用适量裂解缓冲液预处理 ProteinA+G，20uL/管加入各抗体孵育过夜的细胞裂解液中，4℃ 缓慢摇晃孵育 2~4 h。免疫沉淀反应后，4℃，3000rpm，3 min，小心吸取上清，琼脂糖珠用 1 mL 裂解液冲洗 3-4 次，最后加入 15uL 2*SDS 上样缓冲液，100℃，5 min。Laemmli-SDS-PAGE电泳：电泳时根据情况
带Ni的IDA纤维素预装柱 5 mg/次 每端锁紧接口与His.Bind Quick缓冲试剂盒配合使用 真空多支管操作快速纯化多个样品 His.Bind 磁化琼脂糖珠 带Ni的IDA磁性琼脂糖 5 mg/ml 3 m 磁性琼脂糖珠
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