甲基6-(乙基氨基)-5-硝基烟酸酯 Methyl6-(e

DNA甲基化研究方法的回顾与评价（下）

清楚，因此其需要后续进一步分析确定，此外，RLGS图谱不能完全确认所缺失的片段是由于甲基化所致还是由于DNA本身缺失所致[5]且结果分析复杂，不易解释。 2.3.2 MBD（Methyl-CpG binding domain column chromatography，甲基化结合区）柱层析法 根据MBD蛋白家族和MeCP2的特性，Masahiko Shiraishi等2004年[50]提出了一种新的方法MBD柱层析法，用于筛选和发现基因组中甲基化的情况。并且比较了MBD和重亚硫酸盐基因组测序法，得出：用MBD

DNA甲基化研究方法的回顾与评价（上）

脱氨基转变成尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶保持不变（见图1），行PCR扩增所需片段,则尿嘧啶全部转化成胸腺嘧啶，最后,对PCR产物进行测序并且与未经处理的序列比较,判断是否CpG位点发生甲基化。此方法是一种可靠性及精确度很高的方法，能明确目的片段中每一个CpG位点的甲基化状态，但需要大量的克隆测序,过程较为繁琐、昂贵[27]。 图1：重亚硫酸盐处理过程示意图。DNA经重亚硫酸盐处理后，甲基化的胞嘧啶不变，未甲基化的胞嘧啶转变为尿嘧啶 2.2.3 甲基化特异性的PCR（methylation

转甲基酶

转甲基酶 transmethylase ， methyl trans-ferase 亦称为甲基转移酶，已知有各种不同的转甲基酶，以 S- 腺苷蛋氨酸、甜莱碱（ betain ）和二甲基噻亭（ dimethylthetin ）作为甲基的供体，把氨基、羟基、硫氢基（ thiol ）甲基化。结合在四氢叶酸上的活性 C 1 单位的还原而生成甲基，通过 5- 甲基四氢叶酸转甲基酶与同型半胱氨酸（ homocysteine ）被甲基化而生成蛋氨酸。这种酶是以钴胺酰胺（ cobami