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HPLC培训教程

为： N＝()2＝16()2＝5.54()2 N为常量时，W随tR成正比例变化。在一张多组分色谱图上，如果各组分含量相当，则后洗脱的峰比前面的峰要逐渐加宽，峰高则逐渐降低。 用半峰宽计算理论塔数比用峰宽计算更为方便和常用，因为半峰宽更易准确测定，尤其是对稍有拖尾的峰。 N与柱长成正比，柱越长，N越大。用N表示柱效时应注明柱长，如果未注明，则表示柱长为1米时的理论塔板数。（一般HPLC柱的N在1000以上。） 若用调整保留时间(t'R)计算理论塔板数，所得值称为

HPLC法测定磁性微球及大鼠肝组织中的平阳霉素

，得200 μg.mL-1咖啡因溶液作为内标溶液。 　　取上述PYM标准溶液5 μL，内标溶液10 μL，加重蒸馏水定容至0.2 mL，取20 μL进样，得标准色谱图(图1-A)，PYM及内标的保留时间分别为2.91 min和4.14 min。取新鲜无药鼠肝组织，充分匀浆后离心取上清液0.1 mL，加入10%三氯醋酸0.1 mL，混匀，10 000 r.min-1高速离心10 min，取上清液20 μL进样，得空白色谱图(图1-B)。取新鲜含药鼠肝组织，充分匀浆后离心取上清液0.1 mL，加入内标

HPLC的固定相和流动相

，结果减少传质，最终使柱效降低。 　　1．基质的种类 　　1）硅胶 硅胶是HPLC填料中最普遍的基质。除具有高强度外，还提供一个表面，可以通过成熟的硅烷化技术键合上各种配基，制成反相、离子交换、疏水作用、亲水作用或分子排阻色谱用填料。硅胶基质填料适用于广泛的极性和非极性溶剂。缺点是在碱性水溶性流动相中不稳定。通常，硅胶基质的填料推荐的常规分析pH范围为2~8。 　　硅胶的主要性能参数有： ①平均粒度及其分布。 ②平均孔径及其分布。与比表面积成反比。 ③比表面积。在液固吸附