7-硝基吲哚-3-甲醛 7-Nitroindole-3-c

高效液相色谱与化学计量学方法联用

苯丙氨酸、DL-缬氨酸、L-缬氨酸、硼酸、氯化钾、氢氧化钠、乙酸钠(中国医药集团上海化学试剂公司);邻苯二甲醛(以下简称OPA ,中国医药集团上海化学试剂公司) ;N-乙酰-L-半胱氨酸(以下简称 NAC ,Lancaster 公司) ;甲醇(HPLC 级,Merck 公司) ;高纯水. 除甲醇和水外其他试剂均为分析纯. 美国Aglient HP1100 高效液相色谱仪(DAD 检测器) ,ChemStation 化学工作站. 美国Aglient8453 UV - Vis 光谱仪.

下游纯化工艺简介

、总蛋白含量测定 紫外吸收法、Lowry法、Bradford染料结合法（考马斯亮兰G-250）等。 c、样品复杂度检测 HPLC（离子交换、凝胶过滤、反相）、SDS-PAGE、等电聚焦、毛细管电泳（CE）。4、蛋白质的来源 （1）天然蛋白： 天然产物中的目的蛋白一般含量很少而且组分极复杂，在分离过程中须采用多个步骤才能去除各种杂质，并应在整个过程中降低蛋白水解酶的活性。 （2）重组蛋白： 重组蛋白则目标蛋白的丰度较高。重组蛋白主要有三种表达定位： a、细胞质：在这种情况下，必须破坏细胞

原创:下游纯化简易讲义

（注射用降纤酶） 分子量：38 kD；等电点：~5.4 原工艺：阴离子交换，凝胶过滤，第二次阴离子交换，凝胶过滤 达到95%以上纯度，产量6000-10000单位/克蛇毒。(两周) 新工艺：亲和色谱，阴离子交换，凝胶过滤，亲和色谱（一周） 纯度达到98.5%以上，产量达20000-25000单位/克蛇毒。 尖吻蝮蛇毒经过五个步骤的分离纯化后，获得了单成分降纤酶组分，电泳为一条带，HPLC为单峰。 如上图所示，由于每一个步骤均会带来一定的损失，故在可能的情况下应尽量减少下游纯化的步骤