姬姆萨染色实验服务

一、染色原理

姬姆萨染液由 碱性染料（天青色素、亚甲蓝） 和 酸性染料（伊红） 组成，通过细胞成分的化学性质差异实现选择性染色：

• 细胞核蛋白（酸性）：与碱性染料结合，呈紫红色或蓝紫色。
• 嗜酸性颗粒（碱性蛋白质）：与酸性染料结合，呈粉红色。
• 中性颗粒（等电状态）：与伊红和亚甲蓝均结合，呈淡紫色。
  染色效果受pH值影响，需在近中性环境（如pH 6.8磷酸盐缓冲液）中进行，否则可能导致颜色偏差。

二、染液组成与配制

1. 主要成分：
   • 天青Ⅱ、伊红、甘油、甲醇。
   • 部分配方含次甲蓝或天青B。
2. 配制方法：
   • 原液：1g姬姆萨染料 + 66mL甘油 → 60℃溶解2小时 + 66mL甲醇 → 混合过滤。
   • 工作液：原液用磷酸盐缓冲液（PBS, pH 6.8）稀释10倍（如1:9比例）。
   • 即用型：部分商品化染液可直接使用（如Leagene即用型）。

三、操作步骤

常规染色流程：

1. 样本制备：
   • 血液/骨髓涂片需薄而均匀，避免细胞重叠或脱落。
   • 干燥后用甲醇固定2-3分钟。
2. 染色：
   • 滴加工作液覆盖样本，室温染色15-30分钟（时间可调整）。
   • 或采用复合染色法（如瑞氏-姬姆萨联用）：先滴瑞氏染液1-2分钟，再直接加姬姆萨染液混合染色5-8分钟。
3. 冲洗与脱水：
   • 缓慢流水冲洗（避免直接冲击样本），避免先倒掉染液。
   • 可梯度酒精脱水、二甲苯透明，树胶封片。
4. 镜检：
   • 干燥后显微镜观察，细胞核呈紫蓝色，胞浆呈粉红色，结构清晰。

特殊样本处理：

• 染色体显带：需蛋白酶预处理后再染色。
• 组织切片：脱蜡后染色，0.1-0.5%乙酸快速分化冲洗。