总蛋白提取试剂盒

产品简介

本试剂盒用于从哺乳动物组织和培养细胞中提取全蛋白，用含有蛋白酶抑制剂及磷酸酶抑制剂的裂解缓冲液LysisBuffer匀浆裂解组织或细胞，作用温和，提取过程简便高效。获得的全蛋白可用于Western Blot、免疫共沉淀等后续研究，但不能用于蛋白激酶及磷酸酶免疫共沉淀的研究，因本试剂盒中包括这两种酶的抑制剂。

产品组分

使用方法（仅供参考）

一、组织蛋白的提取

1、在每1ml冷Lysis Buffer加入10μl磷酸酶抑制剂，1μl蛋白酶抑制剂和10μl 100mM PMSF，混匀。冰上保存数分钟待用。

2、每100mg固体组织置于培养皿中，手术剪剪碎成3mm×3mm左右的小块，加入0.5～1ml冷Lysis Buffer，玻璃匀浆器上下手动匀浆30-50次，注意低温操作；

3、取组织匀浆液转移到1.5ml预冷的离心管，离心12,000g，4℃离心5 min；

4、取上清转移至新的预冷的离心管中，即为全蛋白提取物，蛋白定量（Bradford法、BCA法）；

5、分装保存于-70℃，避免反复冻融。

二、培养细胞蛋白的提取

1、贴壁培养的细胞，吸去培养基后，加入10ml/150mm培养板的冷PBS洗两次，每次振摇数次以尽量去除培养液；

2、悬浮培养的细胞或用细胞刮子刮下的贴壁细胞，将细胞及培养液移至离心管中，500g~800g离心10min，再用10ml/150mm培养板的冷PBS，500g~800g离心5min洗两次；

3、在每1ml冷Lysis Buffer加入10μl磷酸酶抑制剂，1μl蛋白酶抑制剂和5μl 100mM PMSF，混匀。冰上保存数分钟待用。

4、细胞洗涤后，转至新的预冷的离心管中，加入上述配制好的冷Lysis Buffer，加入量如下表所示：

5、置于4℃摇床平台上，剧烈振荡30s，放置冰上4min，重复5次；

6、12,000g，4℃离心5min，取上清为全蛋白提取物，蛋白定量（Bradford法、BCA法）；

7、分装保存于-70℃，避免反复冻融。

保存条件

-20℃保存，1年有效。

注意事项

1、所有接触样品的用具及试剂均需预冷。

2、提取蛋白后，如有必要，可透析除去表面活性剂。

3、本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

4、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。