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酵母总蛋白提取试剂盒

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  • 中国 北京
  • BC3780-50T
  • 2025年07月12日
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      北京索莱宝科技有限公司

    • 规格

      50T

    酵母总蛋白提取试剂盒
    货号:BC3780
    规格:50T/100T
    保存: 按照储存条件保存,保质期1年。
    产品内容:
    名称 50T 100T Storage
    破壁溶液 25mL 50mL 2-8
    破壁溶液Ⅱ    25mL 50mL 2-8
    裂解液 25mL 50mL 2-8
    β-巯基还原剂 0.625mL 1.25mL 2-8,避光
    蛋白酶抑制剂(100× 0.25mL 0.5mL -20℃,避光
    PMSF100X 0.25mL 0.5mL -20,避光


    操作步骤(仅供参考):
    注:β-巯基还原剂,蛋白酶抑制剂(100×),PMSF100X)这几个试剂使用前先用掌上离心机进行离心。
    1. 收集OD600 = 1.0 酵母菌体,4℃12000rpm离心5min ,弃去上清液。
    2. 将菌体称重,按照比例(50mg500 μL向沉淀中加入500 μL破壁溶液,重悬菌体,冰上孵育5min
    3. 4℃12000rpm离心2min,弃去上清,向沉淀中加入500 μL破壁溶液,重悬菌体,冰上孵育5min
    4. 500 μL的裂解液中加入5 μLPMSF5 μL蛋白酶抑制剂12.5 μL β-巯基还原剂;混匀,放置在冰上备用(根据实际用量准备适量裂解液),现用现配。
    5. 4℃12000rpm离心2min,弃去上清,向沉淀中加入500 μL上述提前备好的裂解液重悬菌液。室温震荡40min~60min,或者煮沸5min
    6. 裂解结束后,4 ℃ 12000rpm 离心 10min。收集上清用于后续实验。
    注意事项:
    1. 裂解液在低温条件下可能会出现沉淀析出现象,37度水浴加热至沉淀完全溶解再使用。
    2. β-巯基还原剂低温状态下可能比较粘稠,可恢复室温后使用。
    3. 提取后的蛋白溶液中含有还原剂,如果要测浓度,请先沉淀蛋白,然后用PBS重新溶解蛋白后再进行测定,否则会影响结果。
    4. 按照每50 mg湿重加500 μL破壁溶液和裂解液,菌体的量不能够过多,否则会使的菌体裂解不充分。
    5. 裂解后的酵母菌蛋白液,应在-80的冰箱中保存。
    6. 裂解液中盐离子浓度较高,必要时可透析除盐后使用。
    7. 如果提取磷酸化蛋白,需要加入磷酸酶抑制剂。
    8. 本试剂只能够用于体外实验科研实验,不能够用于临床、治疗和动物体内实验等,由此产生的后果,概不承担责任。

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