细胞核蛋白和胞浆蛋白提取试剂盒

产品简介

细胞核蛋白和胞浆蛋白提取试剂盒( Nuclear and Cytoplasmic Protein Extraction Kit )用于从哺乳动物组织和培养细胞中提取核蛋白或胞浆蛋白，提取制备过程简便。制备的核蛋白和胞浆蛋白能保持天然活性，并且纯度较高，具有非常高的蛋白提取效率。提取的蛋白可用于进一步的转录因子活性分析、凝胶阻滞实验(gel shift assay)、免疫共沉淀、WesternBlot、ELISA、酶活性测定等后续蛋白质研究。

产品组成

组分	包装
Buffer A	50mL
Buffer B	5mL
Buffer C	10mL
1000×蛋白酶抑制剂	55μL
PMSF（100mM）	1150μL

使用方法

一、实体组织蛋白的提取

1、将组织剪切成小块，取50mg组织样本加入900μLBufferA和100μLBufferB(使用前每mLBufferA加入17μL 100mMPMSF，1μL蛋白酶抑制剂)混匀置于冰上匀浆，静置30min;

2、4℃，1000~1500Xg离心10min。收集上清至新的离心管中，即为胞浆蛋白;

3、在离心沉淀物中加入20OμL预冷的BufferC(使用前每1mLBuffer C，17μL100mMPMSF，1μL蛋白抑制剂)，涡旋剧烈振荡15s，放置冰上30-60min，每间隔10min涡旋剧烈振荡15s;

4、4°C离心，14000Xg，30min，尽快将上清转入一预冷的洁净微量离心管，即得核蛋白;(注：如欲提高最后核蛋白的纯度，注意离心后的沉淀去干净避免残留）

5、上述提取的胞浆蛋白和核蛋白进行蛋白定量（Braford法或BCA法），分装并保存于-80°C，避免反复冻融。

二、培养细胞蛋白提取

1、取培养细胞5X10⁶~1X10⁷个/mL，4°C离心，800Xg，3min收集细胞，弃去培养液，用预冷的PBS洗涤两遍;

2、用移液枪尽可能取去上清，勿留残液;

3、加入预冷的BufferA 450μL与50μLBuffer B(使用前每1mLBufferA，17μL10OmMPMSF，1μL蛋白酶抑制剂)，混匀，放置冰上30min;

4、4°C，1000~1500×g离心10min。收集上清至新的离心管中，即为胞浆蛋白;

5、在离心沉淀物中加入100μL预冷的BufferC(使用前每1mLBufferC，17μL100mMPMSF，1μL蛋白酶抑制剂)，最大转速涡旋剧烈振荡15s，放置冰上30-60min，每间隔10min涡旋剧烈振荡15s;

6、4°C离心，14000Xg，30min，尽快将上清转入一预冷的洁净微量离心管，即得核蛋白；（注：如欲提高最后核蛋白的纯度，注意离心后的沉淀去干净避免残留

7、上述提取的胞浆蛋白和核蛋白进行蛋白定量(Bradford法或BCA法），分装并保存于-80°C，避免反复冻融。

保存方法

4℃保存；1000×蛋白酶抑制剂和PMSF（100mM）-20℃储存；有效期一年。

注意事项

1、所有的试剂及器具均需预冷后使用。

2、细胞的数量不应少于0.5X10⁷个/mL。

3、对于提取的蛋白质，可以采用我公司生产的BCA蛋白浓度测定试剂盒或Bradford蛋白浓度测定试剂盒对提取样品中的蛋白质进行定量。

4、本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

5、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。