NP-40裂解液 NP-40 Lysis Buffer

产品简介

NP-40裂解液是一种比较温和的细胞组织裂解液。通过本细胞裂解液提取得到的蛋白样品，可以用于PAGE，Western blot，免疫沉淀（immunol precipitation，IP）和免疫共沉淀（co-IP）等实验。

NP-40裂解液的主要成分为1%NP-40，50 mM Tris-Hcl（pH7.4），150mM NaCl，以及Sodium Orthovanadate，Sodium Fluoride，EDTA等。温和的裂解方法有利于维持原有的蛋白结构，并维持原有的蛋白间相互作用。本产品需要和常规的蛋白酶抑制剂一起使用，以达到更好的提取效果；本产品含有磷酸酶抑制剂，可用于提取磷酸化蛋白。

用NP-40裂解液裂解得到的蛋白样品，可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的去垢剂等干扰物质，不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。

使用说明

1、使裂解液充分融解，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM，根据具体实验需求可选择加入蛋白酶抑制剂。

2、根据样品的类型进行如下操作：

对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍（若血清中的蛋白没有干扰，可不洗）。按照6孔板每孔加入150-250ul裂解液的比例加入裂解液。用移液器吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后，细胞就会被裂解。

对于悬浮细胞：离心收集细胞，去除培养基，用手指把细胞用力弹散，按照6孔板每孔细胞加入150-250ul裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应无明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成50-100万细胞/管后再裂解。大团的细胞较难裂解充分，而少量的细胞由于裂解液容易和细胞充分接触，相对比较容易裂解充分。

对于组织样品：把组织剪切成细小的碎片。按照每20mg组织加入150-250ul裂解液的比例加入裂解液。（如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。）使用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。

3、样品充分裂解后，4℃ 10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western blot、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

裂解液用量说明：通常6孔板每孔细胞加150ul裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200或250ul。

保存条件

-20℃保存，一年有效。加入蛋白酶抑制剂后建议适量分装 -20℃冻存，避免反复冻融。

注意事项

1、为取得最佳的使用效果，尽量避免过多的反复冻融。可以适当分装后使用。

2、需自备PMSF。

3、裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。

4、可能需要通过一些预实验来摸索最佳的适合您实验条件的裂解液。

5、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。