- 询价
- 江苏省启东市
- 2025年07月30日
万千商家帮你免费找货
0 人在求购买到急需产品
相关阅读
AJE 润色服务限时 8 折起，权威机构信任 15+ 年Cytoscape 教程来了！快速实现顶刊同款通路网络图五大应用案例：Mustang Q 膜层析应用全解析1 个小工具，一次性搞定流程图、质粒图谱和信号通路图- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 提供商：
芳景生物
- 服务名称：
CRISPR KO
CRISPR KO
利用CRISPR基因编辑技术对基因组中一定距离的两个靶点进行切割，并通过非同源末端连接(NHEJ)修复机制实现这两个靶点间序列的敲除(Knock out, KO)，导致该序列功能丧失。
技术优势：
◉提供高效的设计方案，最小化对邻近基因的影响，确保敲除的特异性。
◉高效率敲除，并拥有成功敲除100kb以上基因组序列的经验。
| CRISPR KO(two targets) | ||
| 实验步骤 | 内容 | 周期(周) |
| target测序 | 1.方法：PCR测序 2.目的：确定注射果蝇品系的靶序列，确保gRNA序列正确并进行有效切割 |
1 |
| gRNA和cas9-mRNA合成制备 | 1.gRNA设计：两个靶位点各设计两个gRNA 2.gRNA合成：T7体外转录合成 3.cas9-mRNA合成：优化的cas9-DNA质粒为模板，体外转录合成cas9-mRNA |
2 |
| 显微注射 | 1.注射品系：w1118(或客户指定品系) 2.注射样品：gRNA+cas9-mRNA 3.注射胚胎数量：300-400个 |
2 |
| 杂交鉴定和构建稳定品系 | 1.P0果蝇与平衡子杂交，并进行KO PCR鉴定 2.阳性P0的子代F1果蝇与平衡子杂交，并进行KO PCR和测序鉴定 3.阳性F1的子代F2果蝇与平衡子杂交，并进行KO PCR鉴定 4.阳性F2的子代F3果蝇自交构建稳定/纯合品系 |
8~10 |
| 合计 | 13~15 |
风险提示：丁香通仅作为第三方平台，为商家信息发布提供平台空间。用户咨询产品时请注意保护个人信息及财产安全，合理判断，谨慎选购商品，商家和用户对交易行为负责。对于医疗器械类产品，请先查证核实企业经营资质和医疗器械产品注册证情况。
文献和实验一个很常见的场景：用 siRNA 敲低某个基因，表型很明显；换成 CRISPR 敲除后，表型消失了。于是开始怀疑两次实验哪次是假的。 其实两次可能都是真的，差别在于它们清除蛋白的程度和机制根本不同。 先说结论：RNAi 是在 mRNA 层面部分降解、使蛋白量下降到原来的 10%–30%，属于"减量"；CRISPR KO 是在基因组层面造成移码、让蛋白完全消失，属于"清零"。残留 20% 的蛋白往往足以维持细胞存活，清零则可能致死。所以必需基因只能用敲低，而验证"蛋白是否存在某功能"必须用敲除
同样是"买 CRISPR KO 慢病毒"，有人拿到手一次就做出结果，有人反复重做都是阴性。差别往往不在病毒本身好坏，而在选型时没把自己项目的真实需求说清楚。 先说结论：选 CRISPR KO 慢病毒要看六个维度——载体形式（是否含 Cas9，还是只带 gRNA）、筛选标记、启动子、滴度类型（物理滴度还是功能滴度）、是否经过预验证（有无实测编辑效率数据）、以及交付形式（是否含对照病毒）。其中最容易被忽略的是"是否含 Cas9"和"有没有实测效率数据"这两项，它们决定了你拿到病毒后还要做多少前置
这是 CRISPR 项目里最让人崩溃的结果：基因型确认双等位移码、Western 确认蛋白完全消失，但表型实验毫无变化。"基因敲掉了却什么都没发生"——此时先别急着下"这个基因不重要"的结论，大概率是某个环节出了问题。 先说结论：KO 无表型的原因可以归为四类——基因层面（该细胞根本不表达这个基因、存在旁系同源补偿、替代起始或 NMD 逃逸导致仍有功能性产物）、细胞层面（细胞已有适应性代偿、存在通路冗余）、实验层面（表型读数不敏感、时间点不对、条件没给对）、设计层面（敲除的是非关键区域、克隆
技术资料暂无技术资料 索取技术资料
