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- 江苏省启东市
- 2025年07月30日
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- 提供商：
芳景生物
- 服务名称：
CRISPR KO
CRISPR KO
利用CRISPR基因编辑技术对基因组中一定距离的两个靶点进行切割，并通过非同源末端连接(NHEJ)修复机制实现这两个靶点间序列的敲除(Knock out, KO)，导致该序列功能丧失。
技术优势：
◉提供高效的设计方案，最小化对邻近基因的影响，确保敲除的特异性。
◉高效率敲除，并拥有成功敲除100kb以上基因组序列的经验。
| CRISPR KO(two targets) | ||
| 实验步骤 | 内容 | 周期(周) |
| target测序 | 1.方法：PCR测序 2.目的：确定注射果蝇品系的靶序列，确保gRNA序列正确并进行有效切割 |
1 |
| gRNA和cas9-mRNA合成制备 | 1.gRNA设计：两个靶位点各设计两个gRNA 2.gRNA合成：T7体外转录合成 3.cas9-mRNA合成：优化的cas9-DNA质粒为模板，体外转录合成cas9-mRNA |
2 |
| 显微注射 | 1.注射品系：w1118(或客户指定品系) 2.注射样品：gRNA+cas9-mRNA 3.注射胚胎数量：300-400个 |
2 |
| 杂交鉴定和构建稳定品系 | 1.P0果蝇与平衡子杂交，并进行KO PCR鉴定 2.阳性P0的子代F1果蝇与平衡子杂交，并进行KO PCR和测序鉴定 3.阳性F1的子代F2果蝇与平衡子杂交，并进行KO PCR鉴定 4.阳性F2的子代F3果蝇自交构建稳定/纯合品系 |
8~10 |
| 合计 | 13~15 |
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