StarPure 超快速 DNA 甲基化转化试剂盒（柱式）

tarPure 超快速 DNA 亚硫酸氢盐转化试剂盒（柱式）可以快速地将 DNA 样本中未甲基化的胞嘧啶转化成尿嘧啶，而甲基化胞嘧啶维持不变。双链 DNA 经过高温亚硫酸氢盐处理后，双链 DNA 解链变成单链，在 HSO3- 作用下，胞嘧啶(C)残基发生脱氨基反应，转化为尿嘧啶(U)，甲基化修饰的残基保持不变。进而在后续 PCR 扩增过程中，尿嘧啶(U)会被胸腺嘧啶(T)取代。转化反应时间仅需 10 min，采用柱内脱硫技术，使操作流程更为简单；DNA 投入量范围 2 ng ~2 μg；未甲基化的胞嘧啶转化效率 ≥99%。转化后的产物适用于 PCR 扩增和 NGS 测序等下游应用。

1. 使用前需自备无水乙醇。
2. 本试剂盒可处理约 2 ~ 2000 ng DNA 样本，gDNA 建议投入量大于 200 ng。
3. 为避免试剂结晶影响实验，请将试剂盒置于室温存放。
4. 建议实验前将所有试剂置于 37℃ 烘箱/水浴温育 30 min，以保证溶液无结晶。
5. 本试剂盒处理的 DNA 不适于通过 OD260 定量，不适于通过 OD260/OD280 判定样本质量。
6. 试剂盒内试剂确保在实验时充分混匀，并在使用后及时盖紧盖子，避免试剂长时间暴露于空气中导致试剂挥发、氧化、pH 值变化。
7. 含无水乙醇的 DB 溶液保质期为 14 天。因试剂性质产生白色沉淀为正常现象，使用时注意不要吸取沉淀即可；尽可能现用现配，每次按需配制加 4 倍体积无水乙醇。

储存及运输条件

本产品室温（15~25℃）保存和运输

1. 甲基化转化

1.1. 取 5 μL 需要转化的 DNA 于 200 μL PCR 管中(若 DNA 体积不足 5 μL，建议使用 RNase Free H2O 补齐至 5 μL)，加入 9 倍体积的转化液 BS，涡旋混匀 (建议总体积不要超过 100 μL )；

1.2. 将步骤 1.1 中 PCR 管置于 PCR 仪，运行如下程序:

2. 产物纯化

2.1. 将转化后产物完全转移至 1 个干净的 2 mL 离心管，后加入离心管中液体总体积的 5 倍体积（250μL）结合缓冲液 BB，涡旋混匀；

2.2. 纯化柱置于收集管中，将步骤 1 所得溶液完全转移至纯化柱中，室温静置 2 min，后 25℃ 12,000 rpm离心 1 min，弃滤液，将纯化柱重新放回收集管中；

2.3. 向纯化柱中加入 600 μL 洗涤液 WB，25℃ 12,000 rpm 离心 1 min 弃滤液，将纯化柱重新放回收集管中；

2.4. 向纯化柱中加入 600 μL 脱硫液 DB，室温静置 15 min，25℃ 12,000 rpm 离心 1 min，弃滤液，将纯化柱重新放回收集管中；

2.5. 向纯化柱中加入 600 μL 洗涤液 WB，25℃ 12,000 rpm 离心 1 min，弃滤液，将纯化柱重新放回收集管中；

2.6. 重复操作步骤 2.5，2 次；

2.7. 空纯化柱 25℃ 12,000 rpm 离心 3 min，后转移至 1 个干净的 1.5 mL 离心管，室温开盖晾干 3 min；

2.8. 向纯化柱膜中间滴加 50 μL 洗脱液（TE 或去离子水），室温静置 2 min，25℃ 12,000 rpm 离心 2min，收集产物溶液，即为纯化后的转化 DNA 产物；

2.9. 收集到的 DNA 产物短暂保存可置于 4℃，长期保存置于 -20℃。