【FluoExo®示踪染色】FluoExo®外泌体示踪染色试

FluoExo ® 外泌体示踪染色试剂盒中的荧光染料，为带有长脂肪族碳尾的亲脂性荧光染料，可以稳定地整合到外泌体膜脂质区并发出绿色荧光，其在体内荧光半衰期为 10-12 天。本试剂盒中稀释缓冲液是对哺乳动物细胞具有等渗性，不含洗涤剂或有机溶剂，旨在于染料标记步骤中维持外泌体活性，同时提高染料的溶解度和染色效率。袖珍柱用于以快速、有效去除外泌体标记过程的游离荧光，获得纯化的荧光标记外泌体，即可进行外泌体示踪研究。

帮助用户快速、高效、高质量地完成外泌体荧光标记实验，进行体内、体外外泌体示踪实验。

1、操作便捷，仅需2次孵育+1次纯化即可完成外泌体染色。

2、高效去除游离染料：试剂盒涵盖了去除游离荧光染料的袖珍柱，游离染料去除效果好(>90-98%）。

以不同浓度染料（2µg/ml-200µg/ml）分别上样100µl到袖珍柱中，收集流出液，酶标仪检测染料原液和流出液的荧光值，计算染料去除率，如上图所示。可见，染料浓度在10µg/ml以上时，袖珍柱的游离染料去除率稳定在98-99%以上。 3、外泌体回收率高：试剂盒涵盖了去除游离荧光染料的袖珍柱，回收率高约50%左右。

分别使用5µg/ml和25µg/ml的亲脂性荧光染料标记293F外泌体（Cat# CTE-06）后，上样100µl到Exosupur®袖珍柱，收集流出液，通过纳米流式测定颗粒数，计算颗粒回收率，将袖珍柱再生后继续重复几次实验，如上图所示。可见，不管使用低浓度还是中高浓度荧光染料标记的外泌体，使用袖珍柱进行几次重复实验，颗粒回收率相对较稳定，约在50-60%以上。 请注意：浓度越低回收率越低，建议外泌体浓度高于 1E+11 particles/ml。 4. 外泌体染色效率高：染色后平均绿色荧光标记阳性率为77.38%。

使用本试剂盒标记293F外泌体参考品（Cat# CTE-061）并使用袖珍柱纯化，而后使用NanoFCM检测外泌体标记阳性率，表明大于70%以上外泌体可被标记，且外泌体阳性率平均为77.38%。

按照试剂盒说明书对货架293F外泌体CTE-06进行绿色荧光标记，加入受体细胞中孵育24h（建议荧光标记外泌体颗粒数与接种细胞比例大于5000：1），受体细胞的细胞膜和细胞核分别用红色细胞膜染色剂和 Hoechst 标记，激光共聚焦显微镜扫描结果表明：标记的外泌体 (绿色) 被受体细胞摄取（其中空白组为不加外泌体组）。

1、 制备好的荧光标记外泌体终产物可以保存多久？ 建议尽快使用， 4℃ 保存不超过48h。 2、 可以不去除游离染料吗？ 建议按照上述步骤进行去除，以避免游离染料对后期实验的干扰。 3、 染料标记、纯化会导致外泌体损失吗？ 会损失，一般回收率约30%-50%以上，浓度越低损失越大。因此建议至少取 2 倍于细胞共孵育实验所需外泌体剂量进行染料标记实验。 4、 体外示踪实验，细胞培养时使用正常胎牛血清还是无外泌体血清？ 建议使用无外泌体血清（恩泽康泰货号EDFBS50），以提升细胞对染料标记外泌体的摄取效率。