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- 武汉金开瑞生物工程有限公司
- JKR23011
- 2025年07月29日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
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88
- 保质期：
详询
- 供应商：
广州市左克生物
- 保存条件：
4℃
- 规格：
6T
实验原理
GST Pull-Down实验基于GST(glutathione-S-transferase),即谷胱甘肽-S-转移酶蛋白，可以与谷胱甘肽(Glutathione,GSH)结合,将GSH固定于磁珠上,形成GSH-磁珠,将已知蛋白X与GST融合表达,获得的GST-X蛋白可与GSH-磁珠结合，若体系中存在与X蛋白互做的蛋白Y,则会形成“磁珠-GSH-GST-X-Y”复合物,与X蛋白互做的蛋白即可被分离并检测。
产品优势
• 高特异性与可靠性：GST标签与谷胱甘肽磁珠的亲和力强、结合稳定，显著降低非特异性结合背景。
• 试剂盒提供优化升级的缓冲液，节省实验优化时间
• 高性价比：操作迅速便捷; 成本较低，成本远低于Co-IP或酵母双杂交等体内实验。
应用范围
• 蛋白互作验证：直接检测体外蛋白间结合（如激酶-底物、受体-配体、转录因子-DNA结合蛋白）信号通路研究或者药物靶点开发。
• 病原体-宿主互作研究：鉴定病毒/细菌蛋白与宿主蛋白的相互作用
实验流程
试剂盒组分
常见问题与解答
通过pull-down后WB验证发现,虽然可见目的条带,但是背景很高:
多方面原因造成:
1)实验仪器或试剂被污染,使用洁净的仪器及试剂。
2)转移膜上的目特异吸附导致背景高,实验操作过程中载手套,使用镊子来取,不要接触膜转移面。
3)制备样品中可能有不完全溶释的大的蛋白复合体,则在制备样品后进行知暂超声处理(3次,每次5秒钟),然后离心,取上清后进行后续试验。
4)洗涤不彻底,则需要多次洗涤,并设新增加洗涤液中的NaCl和去垢剂浓度。
5)使用了过多的细胞或组织进行裂解导致背景高,则须减少样本量,推荐100-500ug细胞裂
解物。
6) 蛋白降解也可能出现高背景的情况,尽量使用新鲜制备的样品。
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文献和实验一、GST pull-down 基本知识1. GST pull-down 概念GST pull-down：是利用重组技术将探针蛋白与 GST 谷胱苷肽巯基转移酶融合，融合蛋白通过 GST 与固相化在球珠上的 GSH 谷胱甘肽结合。从而分离出能与融合蛋白相互作用的蛋白的技术。2. GST pull-down 研究对象二、GST pull-down 原理1. GST pull-down 结合原理2. GST pull-down 分离原理三、GST pull-down 流程1. 蛋白的抽提与纯化：①
1.GST-Pull-Down原理 http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/3828600_0.html http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/1168462_0.html http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/1197579_0.html 2.GST-Pull-Down试剂盒购买 http://www.dxy.cn/bbs/actions
大家好，我是红领巾。下面我要讲述的是一个没有小三的故事，一个只有两个蛋白的爱情。首先简要介绍一下 GST pull-down 技术，高大上的说法是通过已经标记的 GST标签蛋白，从细胞裂解液中钓出与之相互作用的蛋白，用以确定已知蛋白与钓出蛋白或已纯化的相关蛋白间的相互作用关系。通俗地讲就是 GST 标签的 A 蛋白（GST-A）与另一标签的 B 蛋白（作者君用的是 His 标签纯化的体外蛋白 His-B）是否相爱的故事。从细胞裂解液中钓出与之相互作用的蛋白，作者君称之为一群人的爱情（n
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