GST pull-down Kit

实验原理

GST Pull-Down实验基于GST(glutathione-S-transferase),即谷胱甘肽-S-转移酶蛋白，可以与谷胱甘肽(Glutathione,GSH)结合,将GSH固定于磁珠上,形成GSH-磁珠,将已知蛋白X与GST融合表达,获得的GST-X蛋白可与GSH-磁珠结合，若体系中存在与X蛋白互做的蛋白Y,则会形成“磁珠-GSH-GST-X-Y”复合物,与X蛋白互做的蛋白即可被分离并检测。

 

产品优势

• 高特异性与可靠性：GST标签与谷胱甘肽磁珠的亲和力强、结合稳定，显著降低非特异性结合背景。

• 试剂盒提供优化升级的缓冲液，节省实验优化时间

• 高性价比：操作迅速便捷; 成本较低，成本远低于Co-IP或酵母双杂交等体内实验。

应用范围

• 蛋白互作验证：直接检测体外蛋白间结合（如激酶-底物、受体-配体、转录因子-DNA结合蛋白）信号通路研究或者药物靶点开发。

• 病原体-宿主互作研究：鉴定病毒/细菌蛋白与宿主蛋白的相互作用

实验流程

试剂盒组分

常见问题与解答

通过pull-down后WB验证发现,虽然可见目的条带,但是背景很高:

多方面原因造成:

1)实验仪器或试剂被污染,使用洁净的仪器及试剂。

2)转移膜上的目特异吸附导致背景高,实验操作过程中载手套,使用镊子来取,不要接触膜转移面。

3)制备样品中可能有不完全溶释的大的蛋白复合体,则在制备样品后进行知暂超声处理(3次,每次5秒钟),然后离心,取上清后进行后续试验。

4)洗涤不彻底,则需要多次洗涤,并设新增加洗涤液中的NaCl和去垢剂浓度。

5)使用了过多的细胞或组织进行裂解导致背景高,则须减少样本量,推荐100-500ug细胞裂
解物。

6) 蛋白降解也可能出现高背景的情况,尽量使用新鲜制备的样品。