[Genview细胞培养] CCK8细胞增殖与细胞毒性检测试

        CCK-8试剂盒（Cell Counting Kit-8）是一种基于WST-8的快速、高灵敏度细胞活性检测的试剂盒，广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的检测。WST-8是一种类似于MTT的化合物，在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的水溶性甲臜化合物。细胞增殖越多越快，则颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅。对于同种类型细胞，颜色深浅与细胞数量在一定限度内呈线性关系。

产品简介：
Cell Counting Kit-8 简称 CCK-8，是一种广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。CCK-8 基于 WST-8，与 MTT 类似，在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的 formazan。对于同样的细胞，颜色的深浅与细胞增殖成正比，与细胞毒性成反比。使用酶标仪在 450nm 波长处测定 OD 值，间接反映活细胞数量。
CCK-8 试剂盒可用于药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验以及生物因子的活性检测等。酚红和血清对本试剂盒的测定无明显影响。CCK-8 对细胞无明显毒性。加入 CCK-8 显色后，可以在不同时间反复用酶标仪读板，使检测时间更加灵活，便于找到最佳测定时间。

CCK-8 优势：
1、使用方便，省去了洗涤细胞，不需要放射性同位素和有机溶剂；
2、能快速检测；
3、检测灵敏度很高；
4、重复性优于 MTT 法；
5、对细胞毒性小；
6、即用型溶液，无需配置，使用方便。灵敏度高，数据可靠，重现性好，尤其适用于悬浮细胞→水溶性，不需换液，操作简便，省时省力

使用方法（仅供参考）：
实验一：细胞活性检测
1、制备细胞悬液：胰蛋白酶消化成单个细胞，计数。
2、细胞接种：根据不同细胞特性，取合适的细胞数铺于 96 孔板，每孔约 100ul 细胞
悬液。将培养板放在培养箱中预培养。
3、向每孔加入 10μl CCK-8 溶液（注意不要在孔中生成气泡，会影响 OD 值的读数）。
4、将培养板在培养箱内孵育 1-4h。
5、用酶标仪测定在 450nm 处的吸光值。

实验二：细胞增殖分析
1、制备细胞悬液：胰蛋白酶消化成单个细胞，计数。
2、细胞接种：根据不同细胞特性，取合适的细胞数铺于 96 孔板，每孔约 100ul 细胞悬液。
3、CO2 培养箱中培养：细胞接种后培养 4-8h，如果不需要贴壁，这步可以省去。
4、加入 10ul CCK-8：由于每孔加入 CCK-8 量比较少，有可能因试剂沾在孔壁上而带来误差，建议在加完试剂后轻轻振板几次以帮助混匀。或者直接配置含 10%CCK-8 的培养基，以换液的形式加入。
5、培养 1-4h：:细胞种类不同，形成的 formazan 的量也不一样。如果显色不够，可以继续培养，以确认最佳条件。一般 OD 值在 1 左右较好，最大不超过 2。
6、在 450nm 测定吸光度。如无 450nm 滤光片，可以使用 420-480nm 的滤光片。可以使用大于 600nm 的波长，例如 650nm，作为参考波长进行双波长测定。

实验三：细胞毒性分析
1、制备细胞悬液：胰蛋白酶消化成单个细胞，计数。
2、细胞接种：根据不同细胞特性，取合适的细胞数铺于 96 孔板，每孔约 100ul 细胞悬液。
3、CO2 培养箱中培养：细胞接种后培养 4-8h，如果不需要贴壁，这步可以省去。
4、加入不同浓度的毒性物质。
5、37°C培养箱中培养：加入毒性物质的培养时间，要看毒性物质的性质和细胞的敏感性，一般要根据细胞周期来决定，至少要一代以上的时间。
6、加入 10ul CCK-8：由于每孔加入 CCK-8 量比较少，有可能因试剂沾在孔壁上而带来误差，建议在加完试剂后轻轻振板几次以帮助混匀。或者直接配置含 10%CCK-8 的培养基，以换液的形式加入。
7、培养 1-4h：:细胞种类不同，形成的甲臜的量也不一样。如果显色不够，可以继续培养，以确认最佳条件。一般 OD 值在 1 左右较好，最大不超过 2。
8、在 450nm 测定吸光度。如无 450nm 滤光片，可以使用 420-480nm 的滤光片。可以使用大于 600nm 的波长，例如 650nm，作为参考波长进行双波长测定。

注：
若暂时不测定 OD 值，可以向每孔中加入 10μl 0.1M 的 HCl 溶液或者 1% SDS 溶
液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24 小时内测定，吸光度不会发生变化。

储存条件
4°C避光保存 1 年，-20°C避光保存 2 年。