4ml超滤离心管30KDa

怎样选择内参蛋白？

量是否一致的参照，也常被用于免疫染色观察细胞的微管结构。 【GAPDH】甘油醛-3-磷酸脱氢酶，是参与糖酵解的一种关键酶，催化糖酵解的第六步,它还参与核转录等事件,核糖核酸转录、DNA复制和修复以及细胞凋亡。由 4 个30-40kDa 的亚基组成，分子量 146kDa，检测条带大约在36kDa。GAPDH 基因几乎在所有组织中都高水平表达，广泛用作WB的内参。在某些生理因素，如缺氧和糖尿病，会增加 GAPDH 在特定的细胞和组织的表达，如出现这类的样品，尽量避免选择 GAPDH 作为内参。 五

各类western转膜条件

蛋白来源：肿瘤手术标本 蛋白名称（可保密）：转录因子 蛋白分子量：33 KDa WB用膜类型、孔径：PVDF膜 转膜方式（恒压、恒流）：350 mA 恒流 转膜时间：150 min 转膜设备：湿转 Bio-Rad 说明：相同条件曾用于数个30-70 KDa的蛋白，都能成功转上，不过没有试缩短时间效果

蛋白质印迹（Western blot）实验方案

缓冲液（湿转）25 mM Tris 碱190 mM 甘氨酸20% 甲醇测定 pH，pH 应为约 8.3。必要时进行调节。对于大于 80 kDa 的蛋白质，我们推荐加入最终浓度为 0.1% 的 SDS。转膜缓冲液（半干转）48 mM Tris39 mM 甘氨酸20% 甲醇0.04% SDS封闭缓冲液5% 奶粉或 BSA（牛血清白蛋白）加入 TBST 缓冲液中。混匀并过滤。过滤失败可能导致出现「斑点」，其中微小的黑色颗粒会在显色过程中污染印迹。实验步骤一、样品裂解◇ 制备细胞培养物裂解物1. 将细胞培养皿置于