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- 免疫共沉淀coimmunoprecipitation
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- 2025年08月18日
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北京百泰派克生物科技有限公司
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免疫共沉淀coimmunoprecipitation
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免疫共沉淀技术原理与应用解析
在dànbáizhì相互作用研究领域，免疫共沉淀（coimmunoprecipitation）凭借其高特异性和可靠性成为验证蛋白-蛋白直接或间接结合的经典方法。该技术基于抗原-抗体特异性结合的原理，通过靶蛋白的特异性抗体将目标蛋白及其相互作用复合物从细胞裂解液中富集，随后通过Western blot或质谱分析鉴定结合伴侣。免疫共沉淀的核心优势在于能够捕获天然状态下形成的蛋白复合物，避免了过度表达系统可能引入的假阳性，同时保留了dànbáizhì的翻译后修饰信息。实验流程通常包括细胞裂解、抗体孵育、免疫复合物沉淀（常用Protein A/G磁珠或琼脂糖珠）以及后续分析步骤。值得注意的是，免疫共沉淀对裂解缓冲液的成分（如去垢剂类型、离子强度）和孵育条件（温度、时间）高度敏感，需根据目标蛋白的理化性质优化条件以避免复合物解离或非特异性结合。
免疫共沉淀的应用范围不jǐnxiàn于二元相互作用的验证，还可用于研究信号通路中多蛋白复合物的组装动态。例如，在激酶-底物关系研究中，通过免疫共沉淀富集激酶后，结合磷酸化抗体检测可揭示其活性状态下的相互作用网络。此外，该技术常与交叉验证方法（如GST pull-down或荧光共振能量转移）联用，提高数据的可信度。实验成本方面，具体费用需要根据实验需求和样品情况来确定，主要涉及抗体、磁珠和检测试剂的投入。
在实验设计阶段，抗体的选择直接影响免疫共沉淀的成功率。多克隆抗体因表位覆盖广而具有更高的捕获效率，但可能增加非特异性背景；单克隆抗体特异性更强，但若识别表位被相互作用界面遮挡则可能导致假阴性。为降低假阳性风险，建议设置同型抗体对照和敲除/敲低细胞系的阴性对照。近年来，基于标签系统（如FLAG、HA）的免疫共沉淀策略逐渐普及，通过外源表达带标签的靶蛋白，利用标签抗体避免内源性抗体可能存在的交叉反应问题。
常见问题：
Q1. 免疫共沉淀中如何区分直接相互作用与间接相互作用？
A：可通过结合尺寸排阻色谱（SEC）或密度梯度离心预分离复合物，缩小候选互作蛋白的分子量范围；进一步采用体外重组蛋白结合实验或交联质谱（XL-MS）验证直接结合界面。
Q2. 低丰度蛋白的免疫共沉淀信号弱该如何优化？
A：建议提高裂解物上样量（需平衡去垢剂浓度），改用高亲和力纳米抗体或酪胺信号放大（TSA）技术增强检测灵敏度；亦可尝试邻近标记技术（如BioID）富集互作蛋白后再进行免疫共沉淀。
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文献和实验免疫沉淀（immunoprecipitation）与免疫共沉淀（coimmunoprecipitation）
一、概述 免疫沉淀（immunoprecipitation）是指利用抗体可与抗原特异性结合的特性，将抗原（常为靶蛋白）从混合体系沉淀下来，初步分离靶蛋白的一种方法。 免疫共沉淀（coimmunoprecipitation）是一种在体外探测两个蛋白分子间是否存在特异性相互作用的一种方法。其原理非常简单，如果两个蛋白在体外体系能够发生特异性相互作用的话，那么当用一种蛋白的抗体进行免疫沉淀时，另一个蛋白也会被同时沉淀下来。与酵母
As with most other proteins, clock proteins physically interact with one another. Coimmunoprecipitation (coIP) is the most straightforward technique to study protein-protein interactions in vivo, if antibodies against the proteins
原理 免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）是利用抗原和抗体的特异性结合以及 Protein A 或 G 特异性地结合到抗体的Fc 片段的现象探测两个蛋白分子间是否存在相互作用的一种方法。在细胞裂解液中加入针对蛋白M的抗体，孵育后再加入Protein A 或 G 预处理的 Sepharose 珠，若细胞中有与蛋白M结合的蛋白 N，就可以形成这样一种复合物：“蛋白 N-蛋白M—抗蛋白 M 抗体—Protein A 或 G—Sepharose 珠”，经 SDS
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