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文献和实验生物素的酶分子,从而大大提高了灵敏度; ④生物素和亲和素间亲和力强,故二者一旦结合,就极为稳定,不受在 ELISA 方法中的保温及多次洗涤影响,而且这种结合反应时间比抗原抗体反应所需时间短; ⑤结果专一性强,非特异性显色或染色背景极低; ⑥第一抗体稀释度高,可节约抗体。 原理 生物素或亲和素与抗体分子或标记物结合后,既不影响前者的亲和力,也不改变后者的特性。亲和素分子的 4 个活性部位并非都和连接在抗体分子上的生物素残基结合,剩下的游离部位尚可作为另一种生物素标记蛋白质的受体。这些特点就是 BAS
。为加速反应,可提高反应的温度,有些试验在 43℃ 进行,但不宜采用更高的温度。抗原抗体反应 4℃ 更为彻底,在放射免疫测定中多使反应在冰箱中过夜,以形成最多的沉淀。但因所需时间太长,在 ELISA 中一般不予采用。 5. 洗涤 洗涤在 ELISA 过程中虽不是一个反应步骤,但却也决定着实验的成败。ELISA 就是靠洗涤来达到分离游离的和结合的酶标记物的目的。通过洗涤以清除残留在板孔中没能与固相抗原或抗体结合的物质,以及在反应过程中非特异性地吸附于固相载体的干扰物质。聚苯乙烯等塑料对蛋白质的吸附
针对同一指标,生化试剂盒和 ELISA 试剂盒的检测结果趋势是一致的吗?
),或者转化1 μmol的有关基团的酶量。 2) ELISA试剂盒检测原理 ELISA是以免疫学反应为基础,将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。由于抗原、抗体的反应在一种固相载体──聚苯乙烯微量滴定板的孔中进行,每加入一种试剂孵育后,可通过洗涤除去多余的游离反应物,从而保证试验结果的特异性与稳定性。在实际应用中,通过不同的设计,具体的方法步骤可有多种。即:用于检测小分子抗原或半抗原的抗原竞争法(图A)、用于检测抗原的双抗体夹心法(图B)等等。 抗体






