病毒包装专用转染试剂

产品介绍    

本公司生产的病毒包装专用转染试剂是一款性能优良的质粒DNA转染试剂， 可以高效转染分子量较大的病毒质粒，适用于慢病毒、腺相关病毒等病毒的包装，提高病毒产量，与其它转染试剂相比，具有不受血清影响、毒性低、稳定性好、转染简单易行、重复性好等优点。

使用方法   

慢病毒包装

以3质粒系统，6孔板为例，请参考下表的转染规模调整，步骤如下:

1、细胞接种: 293T细胞接种于6孔板，每孔接种1.0~2.0×105个细胞，细胞培养12-24小时，使转染时细胞密度达到60-70%融合度。

2、质粒DNA稀释: 将1.5µg包装质粒psPAX2、0.5μg包膜质粒pMD2G和2μg目的基因质粒用Opti-MEM培养基稀释，稀释后的终体积为50µL。

3、转染试剂稀释: 取4μL的转染试剂加入到46μL的Opti-MEM培养基中，稀释后的终体积为50µL。

4、复合物制备：将上述质粒DNA稀释液和转染试剂稀释液混合，轻轻吹打均匀后，室温静置10分钟。

5、转染：将上述100µL复合物加入到6孔板中，轻轻吹打混匀， 转染6~12h，更换成新鲜的细胞培养液，继续培养。

6、慢病毒收集：转染48h，收集第一批含有慢病毒的细胞培养液上清，再加入新鲜的2mL新鲜细胞培养液，24~48h后收集第二批含有慢病毒的细胞培养液上清。

7、离心：3000rpm，4℃离心5min，将上清液转入新的无菌离 心管中保存，用于后续纯化和感染。                  

慢病毒包装实验优化 

可通过改变细胞密度、pDNA的浓度、几种构建慢病毒pDNA之间的配比以及转染试剂浓度对慢病毒包装实验进行优化。保证细胞融合度在60%以上，转染试剂(µL):DNA (µg，pDNA总质量)可以在1:1和3:1之间调整。

          不同培养系统所需转染试剂和DNA的用量

培养系统	单孔面积	接种培养基	Opti-MEM稀释后终体积	DNA转染
				试剂用量	总DNA
6孔板	10cm2	2mL	100µL	4µL	4µg
60mm培养皿	20cm2	5mL	200µL	8µL	8µg
100mm培养皿	60cm2	15mL	600µL	25µL	25µg

 

运输保存   

常温运输，2-8℃可保存一年。 

注意事项  

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。