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北京百泰派克生物科技有限公司
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质谱怎么定量
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质谱怎么定量
质谱怎么定量是现代分析化学中至关重要的技术手段,其核心在于通过测量离子化物质的质荷比(m/z)及其信号强度来实现目标化合物的juéduì或相对含量测定。该技术的定量基础建立在特定离子流强度与样品中分析物浓度之间的线性关系上,通常需要借助内标法或外标法建立校准曲线。在稳定同位素稀释法(SID)中,化学性质相同但质量数不同的同位素标记物作为内标,可有效校正前处理损失和离子化效率差异,使质谱怎么定量达到ng/mL甚至pg/mL级的检测灵敏度。三重四极杆质谱仪通过多反应监测(MRM)模式显著提高信噪比,其定量动态范围可达5-6个数量级,特别适用于复杂基质中痕量化合物的jīngzhǔn测定。高分辨质谱则凭借jīngquè质量数测定和同位素分布匹配,在非靶向定量分析中展现出dútè优势。近年来发展的数据依赖采集(DDA)和数据非依赖采集(DIA)策略,进一步拓展了质谱怎么定量在dànbáizhì组学和代谢组学中的应用广度。具体费用需要根据实验需求和样品情况来确定。
质谱怎么定量的准确性高度依赖于离子化效率的稳定性。电喷雾电离(ESI)易受基质效应影响,而大气压化学电离(APCI)对非极性化合物具有更好的定量重现性。近期发展的离子淌度分离技术通过在质量分析前增加碰撞截面(CCS)筛选维度,有效降低了共洗脱化合物的相互干扰,显著提升了复杂样品定量分析的可靠性。在临床研究领域,液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)已成为小分子生物标志物定量的金标准,其方法验证需严格遵循FDA生物分析方法指导原则。
同位素比率质谱(IRMS)为质谱怎么定量提供了dútè的稳定同位素丰度测定能力,在环境溯源和代谢通量分析中具有bùkětìdài的作用。飞行时间质谱(TOF-MS)凭借高速采集特性,可实现色谱峰上多点的定量分析,有效克服色谱峰形变化带来的定量偏差。值得注意的是,所有质谱怎么定量方法都必须进行严格的方法学验证,包括线性范围、精密度、准确度、基质效应和稳定性等关键参数的评估。
常见问题:
Q1. 如何选择zuì适合特定研究需求的质谱定量离子对?
A:定量离子对应优先选择分子离子或特征性碎片离子,需满足三个标准:具有足够的丰度(通常为基峰的30%以上)、不受基质干扰(通过空白样品验证)、在碰撞能量变化时保持稳定的裂解模式。对于小分子化合物,推荐采用质子化分子离子[M+H]+或去质子化分子离子[M-H]-作为前体离子,并选择丰度zuì高且特异性强的产物离子。
Q2. 在非靶向代谢组学中如何保证定量结果的可靠性?
A:需建立双重质量控制体系:仪器质量控制(QC)样品用于监控系统稳定性,要求保留时间和峰强度的相对标准偏差(RSD)分别小于0.5分钟和15%;同时采用同位素标记的内标混合物校正批次效应。数据处理阶段需应用非线性对齐算法修正保留时间漂移,并通过随机森林等算法识别和排除低重现性特征峰。
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文献和实验简介 使用质谱作小分子药代动力学分析,即PK/MS。除此之外,这些同样的原则也可用于生物基质中肽和蛋白的定量。 传统上,在使用现代质谱定量之前,定量是用HPLC高效液相色谱和UV紫外检测器实现的。HPLC 药代动力学分析建立在保留时间、峰面积和紫外光谱性质的基础上的。HPLC方法的缺点是灵敏度不够、缺乏特异性。我们已经看到一些实例,一个化合物的确已经代谢了,然而保留时间和紫外光谱上,母离子和代谢物无法区分。这种缺少特异性的分析时不时会误导研究者。所以在药代动力学分析中,基于质谱的表征现在
色谱与质谱联合而达到检测大分子物质的目的。 3.代谢组学发展趋势 代谢组学是定量描述生物内源性代谢物对内外因变化应答规律的科学,能够直接反映生命体的终端和表型信息,近年来在疾病诊断和分型、生物标志物发现、药物研发、基因功能解析、代谢途径及调控机理等领域发挥着重要作用。从代谢组学和脂质组学逐年发表的 SCI 文章(图 2)可以看出,代谢组学发展迅猛。 图 2 | 代谢组学在“Web of Science 核心合集”逐年发表的文章统计图 检索日期:2020 年 5 月 3 日,检索关键
质谱多反应监测(multiple reaction monitoring, MRM)技术作为一种质谱检测的分析方法,具有特异性强、灵敏度高、准确度高、重现性好、线性动态范围宽、自动化高通量的突出优点,这些特质能够满足今天很多研究领域的迫切需要。通过MRM技术进行实时的定量监测可以进行药代动力学研究、临床诊断、违禁药物检查、食品化妆品等工业质量控制、环境检测、农业植物学研究以及代谢组学和蛋白质组学Biomarker的发现等相关研究。 1. 质谱MRM技术的原理 MRM技术
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