本试剂盒仅供科研使用
土壤碱性蛋白酶（Solid-Alcalase Protease, S-ALPT）试剂盒说明书
（货号：WS4130F 分光法 24 样）
一、产品简介：
蛋白酶是广泛存在于土壤中的一大酶类，它能水解各种蛋白质以及肽类等化合物为氨基酸，因此土壤
蛋白酶的活性与土壤中氮素的转化状况有极其重要的关系。
土壤碱性蛋白酶（S-ALPT）在碱性条件下将酪蛋白水解产生酪氨酸；酪氨酸与福林酚在碱性条件下反
应生成蓝色化合物；该蓝色物质在 680nm 有特征吸收峰，进而得 S-ALPT 酶活，由于底物酪蛋白自身含有
多种氨基酸，所以在检测过程中必须设置带有底物酪蛋白的对照，以扣除有干扰的背景值，排除假阳性。
二、测试盒组成和配制：
试剂名称
规格试剂名称
保存要求
备注
试剂一
液体 120mL×1 瓶
4℃保存
试剂二
粉剂 mg×2 瓶
4℃保存
临用前甩几下使粉剂落入底部，每
瓶加入 3mL 试剂三 90℃加热搅拌
至分散（约 10-20min），再加 12mL
试剂一搅拌至溶解，最后再加试剂
一定容至 30mL,继续搅拌至全部溶
解（约 30min）；配置完的试剂 4℃
保存，三天内用完。
试剂三
液体 10mL×1 瓶
4℃保存
用前摇匀
试剂四
液体 30mL×1 瓶
4℃保存
用前摇匀
试剂五
液体 20mL×1 瓶
4℃保存
用前摇匀
试剂六
液体 5mL×1 棕色瓶
4℃保存
现用现配，临用前加 10mL 蒸馏水，
4℃保存，一星期内用完
标准品
粉体 mg×1 支 EP
4℃保存
若重新做标曲，则用到该试剂
【注】：试剂二若在磁力搅拌器（带温控）上溶解，可用锡箔纸或保鲜膜盖住烧杯，以免溶解过程中水
分蒸发过快。
三、所需的仪器和用品：
可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）、水浴锅、磁力搅拌器、可调式移液枪
四、土壤碱性蛋白酶（S-ALPT）的测定：
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
样本和试剂浪费！
1、样本制备：
取新鲜土样或者 37 度烘箱风干（需先粗研磨），过 40 目筛网备用。
2、上机检测：
① 分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 680nm，蒸馏水调零。
② 配制好的试剂二需预先 50℃水浴 10min。
③ 在 EP 管中依次加入下列试剂培养：
试剂名称（
μL）
测定管
对照管
土样（
g）
0.15g 鲜土
或 0.1g 干土
0.15g 鲜土
或 0.1g 干土
试剂一
500
500
试剂二
500
50℃振荡培养 2h，同时，余下的试剂二须单独 50℃振荡培养 2h本试剂盒仅供科研使用
2
上歩单独 50℃培养过的试剂二
500
试剂四
500
500
混匀，立即 1700rpm（须准确），4℃离心 10min，上清液待用
④ 显色反应：在 EP 管中依次加入：
上清液
250
250
试剂五
375
375
试剂六
250
250
室温静置 20min（若仍浑浊，可以延长静置时间至 30min 或 1700rpm
离心 10min），取全部上清液于 1mL 玻璃比色皿中，
于 680nm 读取吸光值 A，△A=A 测定管-A 对照管
【注】：若△A 的值在零附近徘徊，可以加样土样取样量（如两倍的土壤质量）。
五、结果计算：
1、标准曲线方程：y = 0.1144x + 0.0034，x 是标准品质量（
μg），y 是ΔA。
2、单位定义：每小时每克鲜土中产生 1μg 酪氨酸为一个酶活力单位。
土壤碱性蛋白酶(S-ALPT) (μg/h/g 鲜土)=(ΔA-0.0034)÷0.1144÷(W1×V1÷V2)÷T
=26.2×(ΔA-0.0034) ÷W1
3、单位定义：每小时每克干土中产生 1μg 酪氨酸为一个酶活力单位。
同等质量的鲜土（参与实际反应的鲜土质量）在 105℃烘干，即得相应的干土质量。
土壤碱性蛋白酶(S-ALPT) (μg/h/g 干土)= (ΔA-0.0034)÷0.1144÷(W2×V1÷V2)÷T
=26.2×(ΔA-0.0034) ÷W2
V1---显色反应步骤中加入的上清液体积，250μL =0.25mL；
V2---培养步骤中总的反应体积，1500μL =1.5mL；
T---反应时间，2h；
W1---样本质量，以实际称取鲜土质量为准；
W2---相对应的干土质量。
附：标准曲线制作过程：
1 制备标准品母液（100μg/mL）：标准品溶解于 100mL 的 0.1mol/L 的盐酸溶液中（母
液需在两天内用且-20℃保存）。
2 把母液稀释成六个浓度梯度的标准品：0, 4, 8, 12, 16, 20. μg/mL。也可根据实际样本
来调整标准品浓度。
3 依据测定管的显色反应阶段加样表依次加样，根据结果即可制作标准曲线。
文献和实验
