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土壤中性磷酸酶(S-NP)试剂盒

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  • ¥370
  • wksubio
  • WS6030F
  • 国内
  • 2026年01月06日
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    • 英文名

      Soil Neutral Phosphatase (S-NP) Kit

    • CAS号

      WS6030F

    • 保质期

      3个月

    • 供应商

      上海瓦兰生物

    • 保存条件

      4℃

    • 规格

      48T

    本试剂盒仅供科研使用
    土壤中性磷酸酶(S-NP)试剂盒说明书
    (货号:WS6030F 分光法 48 )
    一、产品简介:
    土壤磷酸酶对土壤磷素的有效性具有重要作用,是评价土壤磷素生物转化方向和强度
    的指标,也与土壤碳、氮含量、有效磷含量和 pH 有一定的关系。
    本试剂盒提供一种简单、灵敏、快速的检测方法。在中性环境中,土壤中性磷酸酶(S-NP
    催化磷酸对硝*苯酯(pNP P)生成黄色的产物 PNP,该产物在 405nm 处有最大吸收峰。
    通过检测 PNP 405nm 下的增加速率,即可得到土壤中性磷酸酶活性的大小。
    二、试剂盒组分与配制:
    试剂名称
    规格
    保存要求
    备注
    试剂一
    液体 55mL×1
    4℃保存
    试剂二
    粉剂 mg×1
    4℃保存
    临用前加 10mL 试剂一充分溶解,
    一周内用完。
    试剂三
    液体 30mL×1
    4℃保存
    标准品
    粉剂 mg×1
    4℃保存
    若重新做标曲,则用到该试剂。
    三、所需的仪器和用品:
    可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿(光径 1cm)、台式离心机、恒温培养箱、分析天平、
    可调式移液器、蒸馏水、甲苯
    四、土壤中性磷酸酶(S-NP)活性测定:
    建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实
    验样本和试剂浪费!
    1、样本制备:
    取新鲜土样或干土(风干或者 37 度烘箱风干),先粗研磨,过 40 目筛网备用。
    2、上机检测:
    ① 分光光度计预热 30 min 以上,调节波长到 405 nm,蒸馏水调零。
    ② 在离心管中依次加入下列试剂:
    试剂名称(
    μL
    测定管
    对照管
    空白管
    (只做一次)
    土样
    0.1g 鲜土
    0.05g 干土
    0.1g 鲜土
    0.05g 干土
    甲苯
    10
    10
    10
    试剂一
    290
    490
    290
    试剂二
    200
    200
    混匀, 37℃(水浴锅或恒温培养箱)振荡反应 1h
    试剂三
    300
    300
    300
    混匀,12000rpm 室温离心 10min,上清液全部转移至 1mL 玻璃
    比色皿(光径 1cm)中,于 405nm 下读取各管吸光值 AA=A
    测定-A 对照-A 空白(每个测定管需设一个对照管)。
    【注】:1.最后一步检测时,若有结晶析出,需要 37复溶再读取吸光值。
    2.ΔA 在零附近徘徊,可延长 37的孵育时间 T(如增至 4 小时或更长),或增加
    土样质量 W(如增至 0.2g)。则改变后的 T W 需代入计算公式重新计算。本试剂盒仅供科研使用
    2
    3.若测定管 A 值大于 1.5 A 大于 1.5,可缩短 37的孵育时间 T(如减至 0.5 小时或更短)。
    则改变后 T 需代入计算公式重新计算。或对最后一步的待检测上清液(包括测定管、对照管
    和空白管)同时用蒸馏水进行稀释,稀释倍数 D 代入计算公式。
    4.若同时检测一大批同一背景下土壤样本(如都是黄土,黑土,红土,黄土等),可做三次样
    本自身对照管(取平均值作为这批土壤样本的对照管),可从称样到检测步骤节省检测时间。
    五、结果计算:
    1、标准曲线:y = 0.0174x + 0.024x PNP 摩尔质量(nmol),y A
    2、定义:每克土壤每小时水解 PNP P 产生 1nmol 对硝基*酚(PNP)为一个酶活单位。
    S-NP(nmol/h/g 土样)=[(A-0.024)÷0.0174]÷W÷T×D=57.5×(A-0.024)÷W×D
    W---土壤样品质量,g
    D---稀释倍数,未稀释即为 1
    T---催化反应时间,1h
    PNP 相对分子质量---139.11
    附:标准曲线制作过程:
    1 制备标准品母液(10μmoL/mL):向标准品 EP 管里面加入 1.4mL 蒸馏水超声溶解,
    若有结晶析出,需 37℃水浴至完全溶解。
    2 把母液用蒸馏水稀释成以下浓度梯度的标准品:0, 1.6, 3.2, 4.8, 6.4, 8 μmoL/mL。也
    可根据实际样本来调整标准品浓度。
    3 1mL 玻璃比色皿中直接加入:10μL 标准品+490μL 试剂一+300μL 试剂三,405nm
    下读取吸光值。
    4 根据结果制作标准曲线。

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