本试剂盒仅供科研使用
吲哚乙酸氧化酶（IAAO）测定试剂盒说明书
（货号：WS6310F 分光法 24 样）
一、产品简介：
吲哚乙酸氧化酶（IAAO）是一种调节植物体内 IAA 水平重要作用的酶, 其活力的大小, 对调节
体内 IAA 的水平起着重要的作用，它氧化分解 IAA 而使其失活，调节 IAA 水平以保持植物正常生
长发育, 从而影响着植物体的生长速度。
吲哚乙酸氧化酶（IAAO）活性的大小可以用其破坏 IAA 的速度表示。反应体系中加入定量的
IAA 在 IAAO 作用下形成吲哚醛，使体系中 IAA 含量减少，剩余的 IAA 在无机酸存在下与 FeCl3 作用
生生成红色螯合物，可在530 nm 处比色法测定，根据空白与酶液中IAA含量的差值，即可计算出IAAO
活性的大小。
二、试剂盒组成和配制：
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液
液体 70mL×1 瓶
4℃保存
试剂一
液体 5mL×1 瓶
4℃保存
试剂二
液体 5mL×1 瓶
4℃保存
试剂三
液体 5mL×1 瓶
4℃保存
试剂四
液体 1mL×1 支
4℃保存
空瓶×1 个
反应 mix 的制备：临用前取 0.8mL
试剂四至空瓶中，再加 40mL 的 35%
高氯酸（14mL 高氯酸（自备）+26mL
蒸馏水），混合，备用，4℃保存。
标准品
粉体 mg×1 支
4℃保存
若重新做标曲，则用到该试剂。
三、所需的仪器和用品：
可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）、水浴锅、离心机、可调式移液器、
研钵、高氯酸、冰。
四、吲哚乙酸氧化酶（IAAO）活性测定：
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样
本和试剂浪费！
1、 样本制备：
① 组织样本：
取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液，冰浴匀浆，12000rpm，4℃离心 10min，取上清液待用。
【注】：若增加样本量，可按照组织质量（
g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例进行提取
② 液体样本：澄清的液体直接检测；若浑浊则离心后取上清检测。
2、 上机检测：
① 可见分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 530nm，蒸馏水调零。
② 在 EP 管依次加入：
试剂名称（μL）
测定管
对照管
空白管（仅做一次）
试剂一
100
100
100
试剂二
100
100
100
试剂三
200
200
样本
100
100
提取液
500
700
600本试剂盒仅供科研使用
2
③ 显色反应：
上述反应混合液
300
300
300
反应 mix
600
600
600
30℃避光反应 30min，于 530nm 读取吸光值 A，
△A=A 空白-(A 测定-A 对照)。
【注】若 A 测定管低于 0.2，则可以缩短反应时间 T（如减至 15min），或减少加样体
积 V1(如减至 50μL)，则改变后反应时间 T 或加样体积 V1 需代入计算公式重新计算。
五、结果计算：
1.标准曲线：y = 0.1148x-0.0194，x 为标准品浓度(μg/mL)，y 为吸光值ΔA。
2、按样本蛋白浓度计算：
单位定义：每毫克组织蛋白每小时内分解 1μg 的 IAA 定义为一个酶活力单位。
吲哚乙酸氧化酶（IAAO）活力（μg/h/mg prot）＝[(ΔA+0.0194)÷0.1148]×V2÷(V1×Cpr)÷T
=174.2×(ΔA+0.0194)÷Cpr
3、按样本鲜重计算：
单位定义：每克组织每小时内分解 1μg 的 IAA 定义为一个酶活力单位。
吲哚乙酸氧化酶（IAAO）活力（μg/h/g 鲜重）＝[(ΔA+0.0194)÷0.1148]×V2÷(W×V1÷V)÷T
=174.2×(ΔA+0.0194)÷W
4、液体中 IAAO 活力的计算:
单位定义：每毫升液体每小时内分解 1μg 的 IAA 定义为一个酶活力单位。
吲哚乙酸氧化酶（IAAO）活力（μg/h/mL）＝[(ΔA+0.0194)÷0.1148]×V2÷V1÷T
=174.2×(ΔA+0.0194)
V---提取液体积，1mL；
V1---加入反应体系中样本体积，0.1mL；
V2---水浴步骤反应总体积：1mL；
T---反应时间，30min=0.5h；
W---样本质量，g；
Cpr----样本蛋白质浓度，mg/mL，建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。
附：标准曲线制作过程：
1 标准品母液（1mg/mL）：临用前加 1mL 蒸馏水溶解。
2 把母液稀释成以下浓度梯度的标准品：0, 7, 14, 21, 28, 35μg/mL。也可根据实际样本
来调整标准品浓度。
3 按照空白管反应体系检测，试剂三换成各个浓度标准品，根据结果即可制作标准曲
线。
30℃水浴反应 30min（准确时间）
文献和实验
技术资料