IJ0300 JC-1 染料/探针 索莱宝

是一种广泛用于检测线粒体膜电位△Ψ m 的理想荧光探针。在线粒体膜电位较高时,JC-1 聚集在线粒体的基质中,形成聚合物,可以产生红色荧光;在线粒体膜电位较低时,JC-1 不能聚集在线粒体的基质中,此时JC-1 为单体,可以产生绿色荧光。线粒体膜电位的下降是细胞凋亡早期的一个标志性事件。通过JC-1从红色荧光到绿色荧光的转变可以很容易地检测到细胞膜电位的下降,同时也可以用JC- 1从红色荧光到绿色荧光的转变作为细胞凋亡早期的一个检测指标。

操作步骤（仅供参考）： 

阳性对照：

CCCP（10mM ）推荐按照 1 ∶1000 的比例加入到细胞培养液中，稀释至 10μM ，处理细胞 20 分钟。随后按照下述方法装载 JC-1 ，进行线粒体膜电位的检测。对于大多数细胞，通常 10μMCCCP 处理 20 分钟后线粒体的膜电位会完全丧失，JC-1 染色后观察应呈绿色荧光；而正常的细胞经 JC-1染色后应显示红色荧光。对于特定的细胞，CCCP 的作用浓度和作用时间可能有所不同，需自行参考相关文献资料决定。 

悬浮细胞： 

（1）取 10～60 万细胞，重悬于 0.5mL 细胞培养液中，细胞培养液中可以含血清和酚红。 

（2）加入 0.5mL 1~5μg/mL JC-1 工作液，颠倒数次混匀。细胞培养箱中 37 ℃孵育 20 分钟。 

（3） 37℃孵育结束后，600g，4 ℃离心 3～4 分钟，沉淀细胞。弃上清，注意尽量不要吸除细胞。 

（4）用提前预冷的PBS或其它适当溶液洗涤 2 次：重悬细胞，600g 4 ℃离心 3～4 分钟，沉淀细胞，弃上清。

（5）再用适量PBS或其它适当溶液重悬后，用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜观察，也可以用荧光分光光度计检测或流式细胞仪分析。

贴壁细胞： 

注意：对于贴壁细胞，如果希望采用荧光分光光度计或流式细胞仪检测，可以先收集细胞，重悬后参考悬浮细胞的检测方法。 

（1）对于六孔板的一个孔，吸除培养液，根据实验需求可以用 PBS 或其它适当溶液洗涤细胞一次，加入 1mL 细胞培养液。细胞培养液中可以含有血清和酚红。 

（2）加入 1mL 1~5μg/mL JC-1 工作液，充分混匀。细胞培养箱中 37℃孵育 20 分钟。 

（3）37℃孵育结束后，吸除上清，用提前预冷的PBS或其它适当溶液洗涤 2 次。 

（4）加入 2mL 细胞培养液，培养液中可以含有血清和酚红。 

（5）荧光显微镜或激光共聚焦显微镜下观察。 

纯化的线粒体： 

（1）0.9mL 0.2~1μg/mL JC-1 工作液中加入 0.1mL 总蛋白量为 10～100 μg 纯化的线粒体。 

（2）用荧光分光光度计或荧光酶标仪检测：混匀后直接用荧光分光光度计进行时间扫描（time scan），激发波长为 485nm ，发射波长为 590nm 。如果使用荧光酶标仪，激发波长不能设置为 485nm 时，可以在475～520nm 范围内设置激发波长。

（3）用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜观察 。 

荧光观测和结果分析：

检测 JC-1 单体时可以把激发光设置为 490nm ，发射光设置为 530nm ；检测 JC-1 聚合物时，可以把激发光设置为 525nm ，发射光设置为 590nm 。 

注意：此处测定荧光时不必把激发光和发射光设置在最大激发波长和最大发射波长。如使用荧光显微镜观察，检测 JC-1 单体时可以参考观察其它绿色荧光时的设置，如观察 GFP 或 FITC 时的设置；检测 JC-1聚合物时可以参考观察其它红色荧光，如碘化丙啶或 Cy3 时的设置。出现绿色荧光说明线粒体膜电位下降，并且该细胞很可能处于细胞凋亡早期。出现红色荧光说明线粒体膜电位比较正常，细胞的状态也比较正常。 

注意事项： JC-1 探针装载完并洗涤后尽量在 30 分钟内完成后续检测。在检测前需冰浴保存。 

使用本产品的案例（仅供参考）

The normal human fetal hepatocyte cell line/L-02（10 μg/mL JC-1, 37°C; PBS重悬）

L-02 cells were cultured in 6-well plates (1 × 10⁵ cells/well) for 24 h, and then they were incubated with 200 μM H2O2 for 2 h. Then, the cells were separately incubated with the samples at different concentrations (2.5,5 μM) for 3 h in the dark at 37 °C. ubsequently, the cells were stained by fresh JC-1 (10 μg/mL, 37 °C). After that, the L-02 cells were collected and resuspended in PBS buffer. The fluorescence signals of cells were analyzed by flow cytometry (EX = 488 nm green signal, EM = 570?600 nm red signal).

来源文献：Ma H, Zhao J, Meng H, Hu D, Zhou Y, Zhang X, Wang C, Li J, Yuan J, Wei Y. Carnosine-Modified Fullerene as a Highly Enhanced ROS Scavenger for Mitigating Acute Oxidative Stress. ACS Appl Mater Interfaces. 2020 Apr 8;12(14):16104-16113. doi: 10.1021/acsami.0c01669. Epub 2020 Mar 24. PMID: 32186840.

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标题:D-β-Hydroxybutyrate Dehydrogenase Mitigates Diabetes-Induced Atherosclerosis through the Activation of Nrf2

成员:Jie Lin, Qian Ren, Fanjie Zhang, Jing Gui, Xin Xiang, Qin Wan

论文因子:6.7 发表期刊:THROMBOSIS AND HAEMOSTASIS pmid:37399841

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标题:(2E)-1-(2,4,6-Trimethoxyphenyl)-3-(4-chlorophenyl)prop-2-en-1-one,a Chalcone Derivative,Promotes Apoptosis by Suppressing RAS-ERK and AKT/FOXO3a Pathways in Hepatocellular Carcinoma Cells

成员:Meigui Zhang, Jing Li, Ruixia Ma, Jiahui Xi, Lili Xi, Baoxin Zhang, Jing Tian, Zhongtian Bai

论文因子:2.9 发表期刊:CHEMISTRY & BIODIVERSITY pmid:37314937

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标题:Tetramethylpyrazine-Rhein Derivative inhibits the migration of canine inflammatory mammary carcinoma cells by mitochondrial damage-mediated apoptosis and cadherins downregulation

成员:Li X; Lin Z; Wang P; Zhou C; Xu J; Lin J; Lin D; Z

论文因子:7.5 发表期刊:Biomed Pharmacother pmid:37086510

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标题:Carnosine-Modified Fullerene as a Highly Enhanced ROS Scavenger for Mitigating Acute Oxidative Stress

成员:Ma H; Zhao J; Meng H; Hu D; Zhou Y; Zhang X; Wang

论文因子:8.748 发表期刊:ACS Appl Mater Interfaces pmid:32186840

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标题:Molecular mechanisms of quinalizarin induces apoptosis and G0/G1 cell cycle of human esophageal cancer HCE-4 cells depends on MAPK. STAT3. and NF-κB signaling pathways

成员:Zang YQ. Zhai YQ. Feng YY. Ju XY. Zuo F

论文因子:3.779 发表期刊:Environ Toxicol pmid:33030807

基本信息
CAS	No.3520-43-2
英文名称	JC-1
别名	CBIC2;JC-1;1，1，3，3-tetraethyl-5，5，6，6-tetrachloroimidacarbocyanine iodide
分子式	C25H27Cl4IN4
分子量	652.23
溶解性	Soluble in DMSO
纯度	HPLC≥95%
外观(性状)	Solid
储存条件	Powder:-20℃，1 year;Insolvent(母液):-20℃，6 months;-80℃，1 year
EC	EINECS 200-258-5
MDL	MFCD00188475
SMILES	ClC1=C(Cl)C=C([N+](CC)=C(/C=C/C=C2N(C(C=C(Cl)C(Cl)=C3)=C3N\2CC)CC)N4CC)C4=C1.[I-]
背景说明	是一种广泛用于检测线粒体膜电位的荧光探针。通过JC-1从红色荧光到绿色荧光的转变可以很容易地检测到细胞膜电位的下降,同时也可以将该转变作为细胞凋亡早期的一个检测指标。
生物活性	JC-1 (CBIC2) is an ideal fluorescent probe widely used to detect mitochondrial membrane potential. JC-1 accumulates in mitochondria in a potential dependent manner and can be used to detect the membrane potential of cells， tissues or purified mitochondria. In normal mitochondria， JC-1 aggregates in the mitochondrial matrix to form a polymer， which emits strong red fluorescence (Ex=488 nm， Em=595 nm); When the mitochondrial membrane potential is low， JC-1 cannot aggregate in the matrix of mitochondria and produce green fluorescence (ex=488 nm， em= 530 nm)[1].
In Vitro	The sensitivity and specificity of three fluorescent probes used for cytofluorimetric analysis of mitochondrial membrane potential (delta psi) were studied in the U937 human cell line. First， the role of plasmamembrane in influencing the binding of the probes to mitochondria has been investigated. The depolarization of plasmamembrane with high doses of extracellular KCl had no immediate effects on the loading of JC-1， DiOC6(3) and rhodamine 123 (R123). However， after a few hours of culture in the presence of KCl， significant changes were observed only in cells stained with DiOC6(3). Second， a comparative study was performed concerning the effects of agents capable of collapsing deltapsi. While adding FCCP to cell cultures resulted in consistent changes in the fluorescence emission of both JC-1 and DiOC6(3) - but not of R123 - only cells stained with JC-1 responded to valinomycin.[4]
数据来源文献	[1]. A Perelman， et al. JC-1: alternative excitation wavelengths facilitate mitochondrial membrane potential cytometry. Cell Death Dis. 2012 Nov 22;3:e430. [2]. Vera C. Keil， et al. Ratiometric high-resolution imaging of JC-1 fluorescence reveals the subcellular heterogeneity of astrocytic mitochondria. Pflügers Archiv - European Journal of Physiology. 2011，462(5): 693-708. [3]. Jung-Ho LEE， et al. Real-time analysis of amyloid fibril formation of α-synuclein using a fibrillation-state-specific fluorescent probe of JC-1. Biochem. J. 2009， 418:311-323. [4]. Salvioli S， et al. JC-1， but not DiOC6(3) or rhodamine 123， is a reliable fluorescent probe to assess delta psi changes in intact cells: implications for studies on mitochondrial functionality during apoptosis. FEBS Lett. 1997 Jul 7;411(1):77-82.
单位	瓶