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- 文献和实验
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100+
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上海维亦特生物
- 规格:
48T/96T
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文献和实验消耗速率(OCR)降低后,可进一步定位电子传递链的功能异常。 线粒体呼吸链由复合体 Ⅰ‑Ⅳ 以及 ATP 合酶(复合体 Ⅴ)共同组成,通过检测各复合体的酶活,能够明确具体是哪一个复合体发生功能损伤。 常用检测手段有两种:一是分离纯化线粒体后,采用比色法测定复合体酶活;二是通过免疫捕获技术,分别检测复合体 Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ 的活性。 注意要点:若实验已经同时观察到 ATP 水平下降与 OCR 降低,此时补充呼吸链复合体活性检测,相比单纯增加 ROS 相关指标,更有利于把机制研究向上游推进。 图5丨电子
的α磷酸甘油可再经位于线粒体内膜近外侧部的甘油磷酸脱氢酶催化氧化生成磷酸二羟丙酮。线粒体与胞液中的甘油磷酸脱氢酶为同工酶,两者不同在于线粒体内的酶是以FAD为辅基的脱氢酶,而不是NADH+,FAD所接受的质子、电子可直接经泛醌、复合体Ⅲ、Ⅳ传递到氧,这样线粒体外的还原当量就被转运到线粒体氧化了,但通过这种穿梭机制果只能生成2分子ATP而不是3分子ATP。 2.苹果酸-天冬氨酸穿梭(malate aspartate shuttle): 这种穿梭机制主要在肝、肾、心中发挥作用,其穿梭
可以看出CoQ在复合物Ⅰ与Ⅲ,Ⅱ与Ⅲ之间传递还原当量,Cyt c在复合物Ⅲ与Ⅳ之间传递还原当量。他们又将这四种复合物1:1:1:1的比例混合,加上CoQ和Cyt c重组,基本上恢复了线粒体原有的催化能力。 借助上述 实验方法 ,呼吸链各组分的排列顺序已基本明确,但仍有些不一致的看法,其中以CoQ至细胞色素C这一部分研究得还很不清楚,对于Fe-S和CoQ的定位和数量也有争议。 (二)氧化呼吸链 1.NADH氧化呼吸链 人体
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