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上海维亦特生物
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48T/96T
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文献和实验大鼠(ONOO-) 酶联免疫分析 试剂盒使用说明书 本试剂仅供研究使用 目的:本试剂盒用于测定大鼠血清,血浆,细胞上清及相关液体样本中过氧亚**阴离子(ONOO-) 的含量。 实验原理: 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠过氧亚**阴离子 (ONOO-) 水平。用纯化的大鼠过氧亚**阴离子 (ONOO-) 抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入过氧亚**阴离子 (ONOO
)与免疫球蛋白标记碱性磷酸脂酶(戊二醛一步法),按常规方法制备。 抗IgG型抗体酶结合物也可用金黄色葡萄球菌A-蛋白酶结合物替代,称A-蛋白酶联试验(SPA-ELISA)。A-蛋白辣根过氧化物酶结合物(PA-HRP)已有市售标准品,其敏感度稍逊于抗体酶结合物。 底物配制:不同的酶要求选择相应底物,以下为分别适用于比色和肉眼读取结果的两种HRP常用底物配制。 邻苯二胺(OPD):经HRP催化后生成橘红色产物。40mgOPD溶于柠檬酸磷酸
),室温轻摇一小时。 5.洗涤: 二抗孵育结束后,用PBST或TTBS漂洗膜后再浸洗三次,每次5-10min。 六.发光鉴定 一般使用辣根过氧化物酶HRP-ECL发光法或碱性磷酸酶AP-NBT/BICP显色法。 1.HRP-ECL发光法: 将A、B发光液按比例稀释混合。膜用去离子水稍加漂洗,滤纸贴角吸干,反贴法覆于A、B混合液滴上,熄灯至可见淡绿色荧光条带(5min左右)后滤纸贴角吸干,置于保鲜膜内固定于片盒中,迅速盖上胶片,关闭胶盒,根据所见荧光强度曝光。取出胶片立即完全浸入显影液中
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