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- 2025年07月17日
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上海维亦特生物
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48T/96T
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文献和实验问：很多生物防治用的真菌可以产生几丁质酶和蛋白酶等代谢产物，现在实验想检测这两种酶的活性的大小，不知道用那种方法，请教各位！有没有简单的方法如平板法，测代谢产物法等，具体方法如何？ 答：可以用透明圈法，具体做法就是提出几丁质粗酶液后在几丁质—PDA培养基上打孔培养一定时间然后观察透明圈的大小，测代谢产物应该是不行，因为几丁质酶分内外切酶，产物不一，测不出来的，你也可以用聚丙烯酰胺电泳检测。具体方法可以参考这篇文章Chitinase system of Bacillus circulans
【专题讨论】杆状病毒——昆虫细胞蛋白表达系统，影响蛋白表达的因素？
-6及阳性对照Bacmid/CAT，已构建成功。 2. 昆虫细胞Sf9、High Five及其相关培养基、转染试剂均购自Invitrogen公司。抗His单克隆抗体购自Oncogene公司，CAT-ELISA试剂盒购自 Roche。 实验步骤： 一、 昆虫细胞转染： 1． Sf9细胞计数，取6孔板中的两孔，每孔加入9×10 5个细胞(其中一孔设为正常对照)，并以全培培养至少1小时，使细胞贴壁。 2． 准备重组质粒和细胞转染试剂的混合物： a. 溶解1μg纯化重组杆状
MgCl2，dNTP，引物，模板质粒pBS-CHI，无菌ddH2O。 5．实验准备 dNTP混合液（每种25mM），TAE电泳缓冲液，荧光染料，10´加样缓冲液，1.5ml离心管装入铝制饭盒（灭菌）、移液器吸头装入相应的吸头盒（灭菌）。合成的引物：Sense primer 5＇-GGATCCACAATGATGAGAGCC-３＇ Antisense primer ５＇-GATATCATGGTGAGGTAGCTAGCTT-３＇ 目的基因模板质粒：已经克隆在pBS载体上的1128bp几丁质酶
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