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上海维亦特生物
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48T/96T
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文献和实验3 竞争抑制ELISA方法的建立 3.1 抗体的酶标记及质量鉴定 本试验采用改良过碘酸钠法将辣根过氧化物酶标记在抗体上[1],标记完后取上清用Sephedex G200 凝胶层析进行纯化,洗脱液为0.2mol/L pH7.4的PBS,流速为15ml/h,分步收集,每支3ml,以紫外分光光度计测A280吸光度值,以洗脱体积为横坐标,吸光值为纵坐标做图,收集第一峰即为酶标抗体峰。 标记完后用紫外分光光度计在分别在280nm、及403nm处测定酶标记物的A值,计算免疫球蛋白量、摩尔
化的牛血清白蛋白(cBSA)上制备检测抗原,对AMP-KLH偶联物免疫小鼠产生的抗体进行检测。通过对杂交瘤细胞培养上清的检测、鉴定,筛选出8株高亲和力的杂交瘤细胞株,用其制备的腹水ELISA效价达到2×10 6 ,纯化后的单克隆抗体(McAb)可以应用于氨苄青霉素残留的快速检测。 关键词:氨苄青霉素;单克隆抗体;酶联免疫吸附试验 青霉素类药物是历史上最悠久的抗微生物药物,同时也是品种最多和最重要的一类抗生素。目前仍是动物和人类最常使用的抗生素之一。其作用
的条件下一般可保存6个月。有些 不完整的试盒,仅供应包被用抗原或抗体,检测人员需自行包被。以下简述固相载体和包 被过程。 3.1.1 固相载体 固相载体在ELISA测定过程中作为吸附剂和容器,不参与化学反应。可作ELISA中载 体的材料很多,最常用的是聚苯乙烯。聚苯乙烯具有较强的吸附蛋白质的性能,抗体或蛋 白质抗原吸附其上后仍保留原来的免疫学活性,加之它的价格低廉,所以被普遍采用。聚 苯乙烯为塑料,可制成各种形式。 ELISA载体的形状主要有三种:微量
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