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依诺赞(江苏)生物科技有限公司
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100μg
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文献和实验functions [ 16 – 18 ]. These studies demonstrated that Cas9 is a RNA-guided nuclease that is capable of binding to a targetDNA and introduce a double strand break in a sequencespecific manner, and its specifi city is determined by sequenceencoded
40 个),在 Cas9 切开双链之后,模板的两臂同源序列直接互补(HDR,同源修复),从而完成了基因编辑。聪不聪明!上传一张自己的理解图4. Clonal isolation of cell lines 将已编辑的细胞分离开来这个很好理解,在编辑片段中加入抗生素抗性基因或者荧光基因后,可通过抗生素筛选或者 FACS 分离。5. Functional testing 功能验证(1)SURVEYOR nuclease assay(2)Detection of indels or HDR
大家都一样, 1)优化密码子,让 Cas9 蛋白可以在哺乳动物系统中很好的表达。 2)加了核定位序列 (NLS),这样可以把 Cas9 送到细胞核内进行基因组编辑。 3)当然,同时需要表达一个 guide RNA,把 Cas9 定位到靶 DNA 处。 用这个技术,就可以很方便高效廉价地在细胞上做基因编辑:包括敲除、修改、插入。 六、进一步用 Nickase 增加编辑特异
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