植物V-H+-焦磷酸酶(V-H+-PPase)ELISA科研

非损伤微测技术测定液泡H+流速的方法

蛋白活性具有重要意义。            2011年，中科院植物所李银心研究组对非损 伤微测技术（NMT）测定液泡H + 流进行了方法上的若干修正，使得NMT可以更准确地对液泡H + 流进行测定。同时，研究中使用新建立的体系测定NaCl应激下转基因烟草TS15和WT烟草的液泡H + 流速差异，并用NMT方法测定液泡膜上H-ATPase和PPase的活性。研究首先根据NMT的可视化测定的特性，简化了液泡提取方法，省略了传统检测中繁琐的超速离心的步骤。在200mM NaCl胁迫下，H + 外流

植物线粒体制备及其亚结构分级分离

严格的情况下可以用次氯酸钠溶液的（14% m/V 的贮存液进行 20 倍稀释）表面灭菌 5 min。所有材料在使用前需冷却到 2~4°C。 2.2 匀浆缓冲液 为保证产率，在收集并冷却好植物组织后，应该立即匀浆开始线粒体的提取。基本的匀浆缓冲液包括 0.3~0.4 mol/L 的渗透物质（蔗糖或甘露醇) 、2~5 mmol/L 的四价阳离子螯合剂（EDTA 或 EGTA ) 、20~50 mmol/L 碱 性缓冲系统（MOPS、TES 或焦磷酸钠）、5~20 mmol/L 还原剂（半胱

Annexin V 荧光双染细胞凋亡检测试剂盒实验操作指南

105重悬的细胞，300 g离心5 min，弃上清。加入500 μL稀释成1 ×的Annexin V Binding Buffer工作液重悬细胞。 细胞悬液中加入5 μL的荧光素标记-Annexin V和5 μL的细胞核染色液。 轻柔涡旋混匀后，室温避光孵育15~20 min。 反应完成后立即上机检测。如不能及时检测，请于冰上避光静置并于1 h内完成检测。 检测 1）流式细胞仪检测 处理好的样本在流式细胞仪上检测。 2）荧光显微镜分析 取一滴用荧光素-Annexin V/细胞核染色液双染的细胞