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- 详细信息
- 文献和实验
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100+
- 供应商:
上海维亦特生物
- 规格:
48T/96T
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文献和实验」和「扩增区」分割开 PCR 体系配置和 PCR 扩增实验。如果不具备这样的条件,首先要避免荧光定量 PCR 实验结束之后开盖,以防扩增产物形成气溶胶对后续实验造成污染。少量意外开盖不能避免时,可以使用含有 UNG 酶(uracil-N-glycoslyase, 尿嘧啶 DNA 糖基化酶)的扩增预混液。如果在 PCR 反应中以 dUTP 代替 dTTP 参入到 PCR 产物中,形成了含有 dUTP 的扩增产物,UNG 酶能选择性断裂单链和双链 DNA 中 U 碱基的糖苷键, 降解 PCR 扩增
酶(如Msp I和Taq I等),可同时选择几种,以克服用一种酶只能识别特定序列的缺陷,室温作用1h 后加热灭活进行PCR; 3、紫外照射法:未加模板和Taq聚合酶的PCR混合液进行紫外照射,注意事项与方法同上述UV照射法; 4、g射线辐射法:1.5kGy的辐射可完全破坏0.1ng基因组DNA,2.0 kGy可破坏104拷贝的质粒分子,4.0 kGy仍不影响PCR,但高于此限度会使PCR扩增效率下降。引物可受照射而不影响PCR,g射线是通过水的离子化产生自由基来破坏DNA的。(三)尿嘧啶糖苷酶(UNG
Primer-BLAST:NCBI的引物设计和特异性检验工具
数据库覆盖NCBI所有的物种。 实例分析 用人尿嘧啶DNA糖基化酶(uracil-DNA glycosylase genes, UNG, GeneID: 7374)的两个转录 本序列作为一个例子来分析。UNG1的序列长一点(NM_003362),UNG2的序列短一点(NM_080911,注:拿这两个基因的序列ClustalW一下就可以了)。这里用UNG2的序列设计引物,选择RefSeq mRNA database,物种是Human,其它默认。结果如下图A-B
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